Destrano sodio solfato (DSS) somministrata in acqua potabile è un consolidato modello murino lesioni infiammatorie di colite acuta. Questo protocollo descrive il metodo per il trattamento DSS e la preparazione dei tessuti.
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Articolo metodologico
Colite Modeling murino utilizzando destrano sodio solfato (DSS)
In questo articolo
Sommario
Abstract
Colite possono essere causati da infezioni virali o batteriche, insulto ischemico, o malattie autoimmuni, in particolare colite ulcerosa e la variante del colon del morbo di Crohn - Colite di Crohn. Colite acuta può presentarsi con dolore e distensione addominale, malassorbimento, diarrea, ematochezia e muco nelle feci. Stiamo cominciando a comprendere le complesse interazioni tra ambiente, genetica, e disfunzione della barriera epiteliale nei modelli di malattia infiammatoria intestinale e animali di colite sono stati essenziali nel portare avanti la nostra comprensione di questa malattia. Un modello popolare prevede che completa l'acqua potabile di topi con basso peso molecolare destrano solfato di sodio (DSS), con conseguente danno epiteliale ed una robusta risposta infiammatoria nel colon di più giorni
Protocollo
Parte 1: Lesioni-Repair Modello Colite
- Peso di base dovrebbe essere ottenuto per ogni mouse prima dell'inizio del trattamento DSS.
- Effettuare una (w / v) 3% di soluzione di destrano solfato di sodio sale in acqua e filtrare con un filtro da 0,45 micron acetato di cellulosa.
- Sostituire l'acqua potabile nella gabbia del mouse con la soluzione DSS 3% per quattro giorni. I topi non dovrebbero avere accesso a qualsiasi altra fonte d'acqua (punte esclusione cioè immessi sul sistema di irrigazione automatico).
- Il quarto giorno, sostituire la soluzione DSS con l'acqua per altri tre giorni, permettendo una certa ripresa epiteliali del ....
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Discussione
Questo protocollo può essere modificato per modello lesioni acute, lesioni di riparazione, o cronica processi di lesioni del colon.
Lesioni Modifica acuta:
DSS ad lib trattamento per 4-6 giorni, seguita dal sacrificio immediato
Infortuni Riparazione Modifica:
Lesioni con 4-6 giorni di trattamento DSS seguita da periodo di recupero di 3-4 giorni e il sacrificio (come descritto nel protocollo di cui sopra).
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Dichiarazioni
Gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti secondo le linee guida e regolamenti stabiliti dalla Vanderbilt IACUC.
Ringraziamenti
Il finanziamento fornito dal NIH (1 DK080221 K08-01) ei fondi di sviluppo Vanderbilt istituzionali.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Solfato di sodio della destrana | USB Corp., Affymetrix | 9011-18-1 | peso molecolare 40.000-50.000 |
| Formalina fosfato tamponata al 10% | Fisher Scientific | SF100-4 | |
| Isoflurano, USP | Phoenix Pharmaceuticals, Inc. | NDC 57319-474-06 | |
| Cassette TISSUE PATH Macrosette | Fisher Scientific | 15182706 | |
| Siringa BD da 10 ml | BD Biosciences | 309604 | |
| Alcol etilico | Pharmco-AAPER | E190 | Diluire al 70% con acqua distillata |
| Ago da alimentazione dritto da 20G | VWR international | 20068-612 | |
| Ago PrecisionGlide da 27G1/2 | BD Biosciences | 305109 | |
| Forbici da dissezione a punta affilata/ottusa | VWR international | 82027-588 | |
| Pinze di Waugh | VWR international | 82027-428 | |
| Chirurgica non riassorbibile | LOOK Surgical | SP116 | |
| Carta da filtro Whatman | VWR international | 28298-020 | Tagliare secondo necessità |
| Filtro in acetato di cellulosa senza tensioattivi (SFCA) Nalgene | Cole-Parmer | EW-06731-2 | |
| Calibro digitale in composito di fibra di carbonio | Fisher Scientific | 15-007-958 |
Riferimenti
- Okayasu, I. A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice. Gastroenterology. 98 (3), 694-702 (1990).
- Martinez, J. A. Deletion of Mtgr1 sensitizes the colonic e....
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Ristampe e permessi
