Questo video viene illustrato come visualizzare i percorsi assonale di gruppi geneticamente definita di neuroni nel midollo spinale embrionale pulcino utilizzando In ovo di geni reporter sotto il controllo di specifici elementi enhancer.
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Articolo metodologico
Decifrare Percorsi assonale di gruppi geneticamente definito di neuroni nel tubo neurale Chick Utilizzando In ovo Elettroporazione
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Impiego di elementi enhancer di guidare l'espressione di geni reporter nei neuroni è un paradigma ampiamente utilizzato per il monitoraggio proiezione assonale. Per il monitoraggio proiezione assonale degli interneuroni spinali nei vertebrati, della linea germinale mirati geni reporter indicazione del tenore simmetria bilaterale. Pertanto, è difficile distinguere tra il ipsi-e contro-lateralmente assoni proiezione. Elettroporazione unilaterale nel tubo neurale pulcino fornisce un mezzo utile per limitare l'espressione di un gene reporter per una parte del sistema nervoso centrale, ed a seguire proiezione assonale su entrambi i lati
Protocollo
I. Elettroporazione
Uovo di movimentazione
- Mettere le uova in un set umidificata incubatore a 37-38 ° C, preferibile un incubatore con vassoi a dondolo.
- Embrione sono elettroporate dopo circa 66 ore di incubazione, quando hanno raggiunto Hamburger & Hamilton (HH) stadio 18-20. In questa fase la testa si trova ad angolo retto rispetto al tronco (condizione chiamata cervicale flessione) e una vasta serie di extra-embrionali vasi sanguigni, come anteriore, posteriore, destro e sinistro vene vitellina dovrebbe essere visto. Questa è una fase ottimale per enhancer-dipendente specifica espressione 1,3,4. E 'impo....
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Discussione
Elettroporazione di DNA plasmidico in embrione di pollo si evolve come una tecnica potente per in vivo espressione ectopica. La combinazione di stimolatori specifici, ed elettroporazione pulcino fornisce uno strumento rapido ed efficace per decifrare le vie assonale di un gruppo di neuroni geneticamente definito 1,3,5. Utilizzando la Cre / loxP ed i sistemi di amplificazione Gal4/UAS può aumentare i livelli e la durata di espressione. Il quadro che emerge è di una divergenza complesso di spunti assonale che n.......
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Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dalle concessioni di AK dalla Israel Science Foundation, il ministero israeliano della sanità, e DFG (tedesco Research Foundation).
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Riferimenti
- Zisman, S., et al. Proteolysis and membrane capture of F-spondin generates combinatorial guidance cues from a single molecule. J Cell Biol. 178 (7), 1237-1249 (2007).
- Arakawa, T., Iwashita, M., Matsuzaki, F., Suzuki, T., Yamamoto, T.
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Ristampe e permessi
