Questo protocollo video illustra l'isolamento e la coltura di cellule umane endoteliali della vena ombelicale (HUVEC) da cordone ombelicale umano. Una volta isolato queste cellule possono essere utilizzati per test in vitro angiogenesi come il saggio Ottimizzato fibrina Gel Bead dimostrata anche dal laboratorio di Hughes.
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Articolo metodologico
Isolamento di cellule umane endoteliali della vena ombelicale (HUVEC)
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'angiogenesi è un complesso processo multi-step, in cui in risposta a stimoli angiogenici, vengono creati nuovi vasi da vasi esistenti. Questi passaggi sono: la degradazione della membrana basale, la proliferazione e la migrazione (germogliamento) delle cellule endoteliali (CE) nella matrice extracellulare, l'allineamento della CE in corde, formazione lumen, anastomosi, e la formazione di una nuova membrana basale. Molti test in vitro sono stati sviluppati per studiare questo processo, ma la maggior parte solo mimare alcune fasi dell'angiogenesi, e morfologicamente i vasi spesso non assomigliano vasi in vivo. Qui mostriamo uno ottimizzato test in vitro che utilizza l'angiogenesi umano vena ombelicale CE e fibroblasti. Questo modello racchiude in sintesi tutte le fasi iniziali della chiave dell'angiogenesi, e soprattutto i vasi visualizzazione lumen brevetto intercellulare circondato da polarizzata CE. Le navi possono essere facilmente osservati in contrasto di fase e microscopia time-lapse, e recuperato in forma pura per applicazioni a valle.
Protocollo
Procedura
- Posare il cavo sul pad pulito e fuori tamponare il sangue in eccesso. Effettuare tagli freschi su entrambe le estremità del cavo.
- Inserire 21 1 / 2 aghi G con la guaina di plastica ago ON, nella vena. (La vena è la più grande apertura, i 2 più piccoli sono arterie)
- Morsetto l'ago in posizione con un hemostat e collegare la siringa 20cc di Hanks all'ago.
- Spingere il Hanks attraverso la vena con una pressione moderata. Raccogliere i rifiuti nel bicchiere con la candeggina. (Tenendo l'ago e il cavo con una mano mentre si spinge impedirebbe l'ago saltar fu....
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Collagenasi 0,1% | 10 mL per cordone, riscaldati a 37 °C | ||
| Flaconi per colture cellulari | T75, uno per cordone. | ||
| Mezzo di Hank | |||
| forbici | sterili | ||
| bicchiere | sterile | ||
| tubi da 50 mL |
Ristampe e permessi
