Preparazione di oligomeriche β-amiloide 1-42 E induzione di Impairment plasticità sinaptica in fettine di ippocampo

Sommario

Una caratteristica della malattia di Alzheimer è l'elevazione di Aβ _1-42 Peptide. Qui forniamo un protocollo per la preparazione di Aβ sintetico _1-42 Oligomeri, che danneggia dell'ippocampo potenziamento a lungo termine, un cellulare correlato di memoria. Questa procedura è utile per lo studio dei meccanismi di Aβ indotta lo screening della patologia e della droga.

Abstract

Riduzione di valore delle connessioni sinaptiche è probabile che alla base della amnesico sottili cambiamenti che si verificano nelle prime fasi del morbo di Alzheimer s (AD). β-amiloide (Aβ), un peptide prodotto in grandi quantità in AD, è noto per ridurre potenziamento a lungo termine (LTP), un cellulare correlato di apprendimento e memoria. Infatti, compromissione LTP causata da Aβ è un utile paradigma sperimentale per lo studio delle disfunzioni sinaptiche nei modelli dC e lo screening per i farmaci in grado di mitigare tali menomazioni o ritorno sinaptica. Studi hanno dimostrato che Aβ produce l'interruzione LTP preferenzialmente attraverso la sua forma oligomerici. Qui forniamo un protocollo dettagliato per LTP da compromettere la perfusione di oligomerized sintetico Aβ1-42 peptide su fettine di ippocampo acuta. In questo video, delineiamo un passo-passo procedura per la preparazione di Aβ oligomerici

Protocollo

Risospendere peptide β-amiloide

Prima di iniziare sono pronti:

• Aβ _1-42 (polvere liofilizzata)
• 1,1,1,3,3,3-esafluoro-2-propanolo (HFIP)
• Low-binding tubi in polipropilene microcentrifuga (1,5 ml)
• Hamilton siringa a tenuta di gas con stop tuffo Teflon (250 microlitri)
• Dimetilsolfossido (DMSO)

1. Lasciare Aβ liofilizzato _1-42 equilibrare a temperatura ambiente per 30 minuti per evitare la condensa dopo l'apertura del flacone peptide.
2. Sotto la cappa, risospendere peptidi Aβ _1-42 in HFIP ghiacciata per ottenere una soluzione 1 mM e ....

Discussione

Come descritto in precedenza, diversi problemi nella preparazione di Aβ oligomerici può provocare LTP inalterata. Un modo per valutare se il degrado Aβ o la mancanza di oligomerizzazione Aβ potrebbe essersi verificato è quello di valutare la preparazione Aβ con TRIS-Tricine PAGE / analisi Western Blotting e ultracentrifugazione analitica (non descritte in questo protocollo). Quando Western Blotting campioni sono preparati in condizioni non-denaturing/non-reducing, una preparazione di successo dovrebbe generare una firma.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Aβ 1-42 (lifofilizzato)	American Peptide	62-0-80
1,1,1,3,3,3-Esafluoro-2-propanolo (HFIP)	Fluka	52517
Dimetilsulfossido (DMSO)	Biotium, Inc.	90082
Tubi da centrifuga in polipropilene da 50 mL	Corning	05-538-67
Microtubi MaxyClear da 1,5 ml ad alto recupero	Axygen Scientific	MCT-150-L-C
Soluzione salina tamponata al fosfato pH 7,4	Invitrogen	10010-023
Siringhe GASTIGHT da 250 μL	Hamilton Co	1725
Sonicatore a bagno	Branson	3510
Sistema concentratore Savant SpeedVac	Varie	SC 110A