C. elegans Tracciamento del movimento: un metodo per valutare la locomozione nei vermi

Abstract

Fonte: Davies, A. G. et al. Un test per misurare gli effetti dell'etanolo sulla velocità di locomozione di Caenorhabditis elegans.J. Vis. Exp.(2015).

Questo video descrive l'uso di video e software di tracciamento per registrare il movimento dei vermi in un'arena. Il protocollo di esempio misura l'effetto dell'esposizione all'etanolo sulla locomozione dei vermi.

Protocollo

Il seguente protocollo è un estratto da Davies et al, Un saggio per misurare gli effetti dell'etanolo sulla velocità di locomozione di Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2015).

1. Passaggi da eseguire il giorno prima del test

   1. Raccogli i vermi dello stadio L4 su piastre fresche del terreno di crescita dei nematodi (NGM) seminate con un prato di OP50 E. coli e coltivali a 20 °C O/N. Ogni condizione di analisi richiede 10 vermi; raccogliere un eccesso di vermi....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
C. elegans ceppi	Centro di Genetica Caenorhabditis
Piastre Petri da 60 x 15 mm, a tripla ventilazione	Greiner Bio-One	628161	Saranno sufficienti altre marche di piatti.
NGM agar	diverso		NaCl (3 g/L), agar (17 g/L), peptone (2,5 g/L), 1 ml di colesterolo (5 mg/ml in etanolo), 1 ml (1 M) di MgSO4, 1 ml (1 M) di CaCl2, 25 ml (1 M) di KPO4, pH=6, 975 ml di H2O
Forcipe	diverso		ad esempio, Fisher Scientific #10300
37 °C Incubatore	diverso		Per l'essiccazione dell'agar
Anelli di rame	Maestro idraulico	STK#35583 (48 guarnizione filettatura tappo)	Anelli di rame con diametro interno 1,6 cm, diametro esterno 1,8 cm
100% etanolo	diverso
Parafilm M	Bemis	PM996
Telecamera CCD	QImaging	RET-4000R-F-M-12	Questa fotocamera ha un ampio campo visivo.
Stereomicroscopio con attacco C e obiettivo 0.5X	Leica	MZ6	Modello fuori produzione, M60 è l'equivalente attuale.
Sorgente luminosa	Schott	Codice A08923	Retroilluminazione da 3"x3" per un'illuminazione uniforme su tutto il campo visivo
Software di imaging e tracciamento	Cibernetica dei media	ImagePro-Plus v6.0-6.3	Le versioni più recenti del software hanno funzioni di tracciamento.