Metastasi sperimentale e CTL adottivi Immunoterapia modello di trasferimento del mouse

Sommario

Una metastasi al polmone sperimentale e CTL modello murino immunoterapia per l'analisi delle cellule tumorali interazione cellule-T In vivo.

Abstract

Sperimentale modello murino metastasi è un modello metastasi semplice ma fisiologicamente rilevanti. Le cellule tumorali vengono iniettate per via endovenosa (iv) nelle vene coda di topo e colonizzare nei polmoni, quindi, che assomiglia le ultime fasi della metastasi delle cellule tumorali spontanea: la sopravvivenza nel stravaso circolazione, e la colonizzazione negli organi distali. Da un punto di vista terapeutico, il modello sperimentale metastasi è il modello più semplice e ideale, poiché l'obiettivo delle terapie è spesso il punto finale di metastasi: stabilito tumore metastatico nell'organo distale. In questo modello, le cellule tumorali vengono iniettate nelle vene iv coda di topo e ha permesso di colonizzare e crescere nei polmoni. CTL tumore-specifici sono poi iniettate iv in metastasi portante del mouse. Il numero e le dimensioni delle metastasi polmonari possono essere controllati in base al numero delle cellule tumorali da iniettare e il momento della crescita tumorale. Pertanto, le varie fasi di metastasi, da metastasi minimo metastasi estese, possono essere modellati. Metastasi polmonari vengono analizzati con l'inflazione con l'inchiostro, permettendo così più facile l'osservazione visuale e la quantificazione.

Protocollo

1. Modello sperimentale Metastasi mouse

1. Il giorno prima della iniezioni di cellule tumorali, semi di uno T75 fiasco con un massimo di 1 x 10 ⁷ CMS4-Met cellule in 10 ml di terreno RPMI contenente il 10% del siero per ottenere cellule tumorali in rapida crescita. Incubare per una notte a 37 ° C.
2. Il giorno di iniezione, rimuovere il terreno e lavare le cellule una volta con PBS e poi raccogliere le cellule tumorali con il 0,05% tripsina-EDTA a 37 ° C per 5 minuti. Arrestare la reazione con 10 ml di medium RPMI contenente 10% siero. Trasferire le cellule in una provetta conica.
3. Spin giù le cellule a 1300 rpm in una centrifuga So....

Materiali