Un saggio in vitro per studiare le interazioni microbiche nella co-cultura

Abstract

Fonte: Temkin, M. I. et al. Saghi di co-coltura ad alta produttività per l'indagine delle interazioni microbiche. J. Vis. Esp. (2019)

Questo video mostra un saggio in vitro per studiare le interazioni microbiche tra Corynebacterium propinquum e Staphylococcus in una co-coltura.

Protocollo

1. Inoculazione con organismi target

NOTA: Dopo l'incubazione notturna, assicurati che le colture siano torbide. Alcune colture batteriche possono floculare sul fondo del tubo di coltura. Vortice i tubi di coltura per disperdere gli ammassi e valutare la torbidità della coltura.

1. Preparare la piastra bersaglio riempiendo ogni pozzo di una piastra vuota da 12 pozzi con 1,8 mL di brodo Brain-heart-infusion (BHI) e 200 μL della coltura bersaglio durante la notte.
   NOTA: Un organismo bersaglio si riferisce all'organismo il cui stato di inibizione viene determinato tramite il test di interazione di co-coltura. Per questo esperimento, gli organismi bersaglio sono Staphylococcus spp. isolati da campioni di lavaggi nasali umani.
2. Srotoli e posiziona un timbro di inoculazione sterile sulla piastra bersaglio. Fai ruotare delicatamente le colture nei pozzi, facendo attenzione a non contaminare i pozzi vicini.
3. Solleva il timbro di inoculazione e assicurati che ci sia una goccia di coltura bersaglio diluita su ogni punta del timbro.
4. Prepara una piastra di controllo per monocoltura posizionando il timbro di inoculazione su una piastra di bioanalisi non inoculata e dondola delicatamente il timbro in modo che una goccia di coltura inoculi ogni pozzo. Una volta rimosso il timbro di inoculazione, una goccia di coltura dovrebbe essere visibile nei pozzi della piastra di bioanalisi.
   1. Se qualche pozzo non è inoculato con il timbro di inoculazione a causa di livelli disequili di substrato, si puntino 3 μL di coltura diluita durante la notte sul lato destro dei pozzi usando una pipetta.
5. Inoculare le piastre di bioanalisi come fatto sopra (vedi passo 1.4.1), ma allinea il timbro in modo che le punte si allineino con il lato destro della piastra a 12 pozzi. Assicurati che il timbro non entri in contatto con la colonia batterica esistente durante l'inoculazione dei pozzi.
6. Rimuovi con cura il timbro e rimettilo nella piastra di bersaglio.
7. Ripeti l'inoculazione per ogni piastra di bioanalisi finché tutte le placche non sono inoculate.
8. Incubare le piastre del biosaggio capovolte alla temperatura appropriata per 7 giorni.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Piastra di coltura cellulare a 12 pozzi, sterile con coperchio	Greiner bio-one	665 180
Agar, batteriologico	VWR	J637
Brodo per infusione cervello e cuore	Dot Scientific	DSB11000-5000