Articolo metodologico

Micro-dissezione del cervello di ratto per estrazione RNA o proteine ​​da Regione specifiche del cervello

DOI:

10.3791/269

⸱

30 agosto 2007

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1Laboratory of Neurodegenerative Diseases, Department of Anatomy, LKS Faculty of Medicine, The University of Hong Kong - HKU

In questo articolo

Sommario

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Micro-dissezione del cervello di ratto in varie regioni è estremamente importante per lo studio di diverse malattie neurodegenerative. Questo video dimostra micro-dissezione di quattro regioni del cervello importanti includono bulbo olfattivo, la corteccia frontale, ippocampo e striato in tessuto fresco cervello di ratto. Consigli utili per la rimozione rapida delle rispettive regioni al fine di evitare l'RNA e la degradazione delle proteine ​​del tessuto sono dati.

Abstract

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Micro-dissezione del cervello di ratto in varie regioni è estremamente importante per lo studio di diverse malattie neurodegenerative. Questo video dimostra micro-dissezione di quattro regioni del cervello importanti includono bulbo olfattivo, la corteccia frontale, ippocampo e striato in tessuto fresco cervello di ratto. Consigli utili per la rimozione rapida delle rispettive regioni al fine di evitare l'RNA e la degradazione delle proteine ​​del tessuto sono dati.

Protocollo

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Fase 1

Il sacrificio del ratto secondo i protocolli stabiliti. Togliere il cervello dal cranio e sciacquarlo in ghiaccio freddo DEPC trattate acqua Milli Q per rimuovere il sangue di superficie.

Fase 2

Mettere sul piatto freddo dei metalli. Tagliare il cervello bi-metà in emisfero destro e sinistro.

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Figura 1. Le posizioni di taglio dal punto di vista mediale dell'emisfero ratto

Fase 3

Raccogliere il bulbo olfattivo subito dopo il primo taglio. Flash congelare il campione in azoto liquido e conservare a -80 ° C.

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Figura 2. Dissezione bulbo olfattivo

Fase 4

Raccogliere il diritto corteccia frontale dopo il secondo taglio, usando una lama e un Dumont n. 5 pinze. Flash congelare il campione in azoto liquido e conservare a -80 ° C.

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Figura 3. Corteccia frontale dissezione

Fase 5

Raccogliere lo striato (nucleo caudato) subito dopo il terzo taglio con l'aiuto di due pinzette Dumont n.5. Flash congelare il campione in azoto liquido e conservare a -80 ° C.

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Figura 4. Striato (nucleo caudato) dissezione

Fase 6

Per raccogliere l'ippocampo, inserire il lato ventrale del cervello e quindi rimuovere mesencefalo per esporre l'ippocampo. Sezionare l'ippocampo dalla corteccia con due pinze No.5 Dumont. Flash congelare il campione in azoto liquido e conservare a -80 ° C.

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Figura 5. Hippocampus dissezione

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Discussione

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Differenti regioni del cervello associate con diverse malattie neurodegenerative. Per esempio, corteccia frontale e nello striato rapportarsi con la malattia di Parkinson s mentre l'ippocampo si riferisce alla malattia di Alzheimer. Preciso micro-dissezione del cervello ci permette di rilevare i cambiamenti mRNA e proteine ​​nella regione malato con maggiore precisione.

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Dichiarazioni

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Gli animali sono stati trattati secondo il protocollo per l'uso di animali nella ricerca approvato dalla Commissione per l'uso di animali vivi in ​​didattica e la ricerca (CULATR) presso l'Università di Hong Kong e secondo il National Institutes of linee guida per l'uso sanità animale.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
MicroscopioOlympus Corporation
Strumenti per dissezionePiastra di metallo, pinze, lama, ecc. Avvolti singolarmente in foglio di alluminio e riscaldati a 180 °C per otto ore per eliminare le RNasi. Raffreddati a fondo prima dell'uso.

Riferimenti

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Palkovits, M. Maps and guide to micro-dissection of the rat brain. , Elsevier. New York. (c.1988).
  2. Swanson, L. W. Brain maps: structure of the rat brain. 3rd revised edition. , Elsevier Academic Press. (2004).

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Estrazione di RNAbulbo olfattivocorteccia frontalestriatoippocampoazoto liquido

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