Registrazione delle oscillazioni della banda gamma dai neuroni del nucleo peduncolopontino in una fetta di cervello

Abstract

Fonte: Urbano, F. J., et al. Registrazione delle oscillazioni della banda gamma nei neuroni del nucleo peduncolopontino. J. Vis. (2016).

Il video mostra il metodo per registrare le oscillazioni della banda gamma nei neuroni PPN. Utilizzando una sezione sagittale del cervello con bloccanti sinaptici in aCSF, impiega impulsi di corrente positiva tramite una pipetta di cerotti per aprire i canali del calcio, inducendo un'attività sottosoglia cruciale per la veglia.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Preparazione del liquido cerebrospinale artificiale standard (aCSF)

1. Preparazione della soluzione madre A
   1. Aggiungere 700 ml di acqua distillata in un becher pulito da 1 litro prima di aggiungere prodotti chimici.
   2. Mescolando continuamente un volume di 500 ml, aggiungere 136,75 g di NaCl, 6,99 g di KCl, 2,89 g di MgSO₄ e 2,83 g di NaH₂PO₄.
   3. Aggiungere altra acqua distillat....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
saccarosio	Sigma-Aldrich	S8501	C12H22O11, peso molecolare = 342,30
bicarbonato di sodio	Sigma-Aldrich	S6014	NaHCO3, peso molecolare = 84,01
cloruro di potassio	Sigma-Aldrich	P3911	KCl, peso molecolare = 74,55
Cloruro di magnesio esaidrato	Sigma-Aldrich	Codice: M9272	MgCl2 · 6H2O, peso molecolare = 203,30
Cloruro di calcio diidrato	Sigma-Aldrich	Visualizzazione del materiale C3881	CaCl2 · 2H2O, peso molecolare =147,02
D-(+)-glucosio	Sigma-Aldrich	G5767	C6H12O6, peso molecolare = 180,16
Acido L-ascorbico	Sigma-Aldrich	Codice: A5960	C6H8O6, peso molecolare =176,12
cloruro di sodio	Acros Organics	327300025	NaCl, peso molecolare = 58,44
Gluconato di potassio	Sigma-Aldrich	G4500	C6H11KO7, peso molecolare = 234,25
Fosfocreatina di(tris) sale	Sigma-Aldrich	P1937	C4H10N3O5P · 2C4H11NO3, peso molecolare = 453,38
HEPES	Sigma-Aldrich	H3375	C8H18N2O4S, peso molecolare = 238,30
EGTA	Sigma-Aldrich	E 0396	[-CH2OCH2CH2N(CH2CO2H)2]2, peso molecolare = 380,40
Adenosina 5'-trifosfato sale di magnesio	Sigma-Aldrich	Visualizzazione del materiale A9187	C10H16N5O13P3 · xMg2+, peso molecolare = 507,18
Guanosina 5'-trifosfato sale sodico idrato	Sigma-Aldrich	G8877	C10H16N5O14P3 · xNa+, peso molecolare = 523,18
Tetrodotossina citrato	Laboratori Alomone	T-550	C11H17N3O8, peso molecolare = 319,27
Acido DL-2-ammino-5-fosfonovalerico	Sigma-Aldrich	Codice: A5282	C5H12NO5P, peso molecolare = 197,13
CNQX sale disodico idrato	Sigma-Aldrich	C239	C9H2N4Na2O4 · xH2O, peso molecolare = 276,12
stricnina	Sigma-Aldrich	S0532	C21H22N2O2, peso molecolare = 334,41
Cloridrato di mecamilammina	Sigma-Aldrich	Visualizzazione del materiale M9020	C11H21N · HCl, peso molecolare = 203,75
Gabazina (SR-95531)	Sigma-Aldrich	S106	C15H18BrN3O3, peso molecolare = 368,23
Cloridrato di ketamina	Mylan	Codice 67457-001-00
microscopio	Nikon	Eclipse E600FN
Micromanipolatore	Strumenti Sutter	ROE-200
Micromanipolatore	Strumenti Sutter	MPC-200
amplificatore	Dispositivi molecolari	Multiclamp 700B
Convertitore A/D	Dispositivi molecolari	Digidata 1440A
calorifero	Strumenti Warner	TC-324B
pompa	Cole-Parmer	Masterflex L/S 7519-20
Cartuccia della pompa	Cole-Parmer	Stampante Masterflex 7519-85
Estrattore per pipette	Strumenti Sutter	P-97
macchina fotografica	Q-Imaging	RET-200R-F-M-12-C
Vibratomo	Leica Biosystems	Leica VT1200 S
Sistema di refrigerazione	Strumenti a vibratomo	900R
attrezzatura
microscopio	Nikon	Eclipse E600FN
micromanipolatore	Strumenti Sutter	ROE-200
micromanipolatore	Strumenti Sutter	MPC-200
amplificatore	Dispositivi molecolari	Multiclamp 700B
Convertitore A/D	Dispositivi molecolari	Digidata 1440A
calorifero	Strumenti Warner	TC-324B
pompa	Cole-Parmer	Masterflex L/S 7519-20
cartuccia della pompa	Cole-Parmer	Stampante Masterflex 7519-85
estrattore per pipette	Strumenti Sutter	P-97
macchina fotografica	Q-Imaging	RET-200R-F-M-12-C