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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Anestesia e chirurgia animale
- Pesa e anestetizza il topo con il tuo regime di anestesia approvato dal tuo comitato locale per la cura degli animali.
- Eseguire un pizzicamento della coda o dei piedi con una pinza per confermare l'anestesia profonda prima dell'intervento chirurgico.
- Posizionare il mouse in un apparato stereotassico e fissarne la testa.
- Applicare un unguento per gli occhi su entrambi gli occhi per mantenerli umidi. Segui le linee guida locali per la cura degli animali per quanto riguarda l'analgesia pre e postoperatoria.
- Radere i capelli con un tagliacapelli chirurgico. Praticare una piccola incisione (12-15 mm) al centro dell'area chirurgica esposta con le forbici. Usando una pinza, allontana delicatamente il cuoio capelluto dalla linea mediana.
- Separare delicatamente la pelle e rimuovere il tessuto residuo. Pulisci il cranio usando bastoncini di cotone rivestiti di perossido di idrogeno.
- Praticare due piccoli fori di raggio 1,0-1,5 mm su entrambi i lati sinistro e destro del cranio per consentire l'inserimento dei microelettrodi di registrazione nelle regioni M2 sotto uno stereomicroscopio (Figura 1A).
nota: Posizioni stereotassiche di M2 bilaterale: 1,94 mm anteriormente alla bregma, 1,0 mm lateralmente alla linea mediana e 0,8-1,1 mm ventrale alla dura dura.
- Rimuovere con cautela la dura madre con un ago di tungsteno.
- Micropipette in borosilicato di vetro (diametro esterno: 1,0 mm) come microelettrodi di registrazione con resistenza di 1-2 MΩ.
- Inserire due microelettrodi di registrazione separati riempiti con NaCl 0,5 M nei fori utilizzando micromanipolatori meccanici (a 60°, Figura 1B).
2. Registrazioni LFP in M2 bilaterale di topi
- Abbassare lentamente gli elettrodi di vetro sinistro e destro nelle coordinate appropriate di M2 bilaterale (Figura 1C).
- Per il controllo di qualità, testare la resistenza di ciascun elettrodo utilizzando l'amplificatore differenziale prima di acquisire gli LFP.
- Imposta il processo di registrazione su 0,1 Hz passa-alto e 1.000 Hz passa-basso con amplificazione 1.000x.
- Raccogli dati LFP grezzi digitalizzati di almeno 60 s di attività spontanee in uno stato stabile, con topi che respirano uniformemente a una frequenza respiratoria di 2 respiri al secondo in anestesia.
- Dopo la registrazione, sollevare lentamente gli elettrodi dal cervello, quindi sopprimere i topi mediante lussazione cervicale veloce.
- Salva i dati e analizzali offline.
