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Articolo metodologico

Infusione cerebrale stereotassica diretta di proteine beta-amiloidi per un modello di malattia di Alzheimer

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8 luglio 2025

In questo articolo

Abstract

Fonte: Jean, Y. Y. et al., Infusione stereotassica di beta-amiloide oligomerica nell'ippocampo del topo. J. Vis. Exp. (2015)

Questo video dimostra la precisa infusione stereotassica di beta amiloide nel giro dentato per stabilire un modello murino della malattia di Alzheimer. L'accurata determinazione delle coordinate e la somministrazione controllata delle proteine beta-amiloidi provocano la degradazione neuronale, interrompendo l'elaborazione della memoria e contribuendo allo sviluppo della malattia di Alzheimer.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Preparare Strumenti Chirurgici e Soluzioni per la Chirurgia

  1. Autoclava tutti gli strumenti chirurgici in acciaio inox.
  2. Preparare etanolo al 70% diluendo etanolo assoluto a 200 gradi con acqua distillata deionizzata sterile di grado molecolare.
  3. Collegare l'ago da 29 G alla siringa Hamilton. Pulire l'interno della siringa e dell'ago di Hamilton aspirando ed espellendo ripetutamente acqua nanopura per 1 minuto. Ripete....

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Dichiarazioni

Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Ketamina HCl (100mg/ml)Henry Schein Medical1049007100 mg di ketamina per 1 kg di animale
Xilazina (20mg/ml)Henry Schein Medicalnon disponibile10 mg di xilazina per 1 kg di animale
Aβ1-42David Teplow/UCLAnon disponibile100 μM; Questa amiloide è stata utilizzata nell'articolo
Aβ1-42BachemH-1368Può essere utilizzato al posto dell'amiloide del laboratorio Teplow
Aβ1-42Peptide americano62-0-80BPuò essere utilizzato al posto dell'amiloide del laboratorio Teplow
Aβ1-42 strapazzatoPeptide americano62-0-46BPuò essere utilizzato come peptide di controllo per il confronto di Aβ1-42
GenTeal Gel Lubrificante OcchiNovartisnon disponibilePer mantenere umidi gli occhi del topo durante l'intervento chirurgico; può essere trovato nelle farmacie locali
Refresh Optive Lubrificante CollirioAllergannon disponibilePer mantenere umidi gli occhi del topo durante l'intervento chirurgico; può essere trovato nelle farmacie locali; Può essere utilizzato al posto di GenTeal
BetadinaStoeltingCodice: 50998Per sanificare e disinfettare
Spatola rotonda/affusolataVWR82027-490Per aprire la bocca dell'animale
Bulldog Serras Morsetti (dim. ganasce 9X1,6mm; Lunghezza 28mm)Strumenti per la scienzaCodice: 18050-28opzionale; Per tenere separata la pelle del cuoio capelluto durante l'iniezione
Forbici fini dritte (tagliente 25 mm; Lunghezza 11,5 cm)Strumenti per la scienzaCodice 14060-11Per il taglio del cuoio capelluto
#3 Manico del bisturiStrumenti per la scienzaCodice 10003-12
#11 Lama chirurgicaStrumenti per la scienzaCodice 10011-00Per eseguire l'incisione del cuoio capelluto
Pinza standard per studenti (dim. punta 2,5x1,5 mm; Lunghezza 11,5 cm)Strumenti per la scienzaCodice: 91100-12Per tenere chiuso il cuoio capelluto durante la sutura
Kit combinato rifinitoreKent ScientificoCL9990-1201Per la rasatura dei peli
Ricircolatore d'acqua calda T/PumpKent ScientificoTP-700Per riscaldare l'animale durante l'intervento chirurgico
Pad da guerra riutilizzabile (5" x 10")Kent ScientificoCodice TPZ-0510FEAPer collegarlo al ricircolo dell'acqua calda T/Pump per riscaldare l'animale durante l'intervento chirurgico
Micro trapano a batteriaStoeltingCodice: 58610Usa frese in acciaio da 0,8 mm per praticare dei fori nel cranio
Strumento stereotassico standard da laboratorio con adattatore per topo e ratto neonataleStoeltingCodice: 51615
Solo per Mouse Strumento StereotassicoStoeltingCodice: 51730Può usarlo al posto di Stoelting Cat. #51615
Iniettore stereotassico per eccellenzaStoeltingCodice: 53311
Sterilizzatore di perline di vetro a seccoStoeltingCodice: 50287Per la sterilizzazione di strumenti in acciaio inox
Telo chirurgico sterile (18" x 26")StoeltingCodice: 50981
Hamilton Siringa 50 ml, Modello 705 RN SYR, NDLAzienda HamiltonCodice: 7637-01Per l'iniezione cerebrale; utilizzare siringhe diverse per soluzioni diverse
Ago calibro 29, mozzo piccolo RN NDLAzienda Hamilton7803-06Da collegare alla siringa Hamilton per l'iniezione cerebrale
Siringhe di tubercolina BD da 1 mlVWRBD309659Per la somministrazione di anestesia e soluzione salina
Ago calibro 30 (0,5")VWRBD305106Per la somministrazione di anestesia e soluzione salina
Bilancia elettronica portatile serie CS (Ohaus)VWRCodice 65500-202Per pesare gli animali per determinare la dose di anestesia
Piastra riscaldante (Dim. piastra superiore 7,25x7,25 pollici)VWRCodice 47751-148Per riscaldare gli animali dopo l'intervento chirurgico
Sutura in seta Sofsilk C-1 Taglio 3/8, 12 mmCovidienS1173Per chiudere la ferita
Adesivo tissutale Vetbond (3M)Santa Cruz BiotecnologiaSC-361931Opzionale: per facilitare la chiusura della ferita; Utilizzare con sutura.
Applicatori sterili con stelo in legno con punta in cotoneFisher scientificoCodice 22-029-488Per la pulizia e l'asciugatura di ferite chirurgiche
Fisherbrand Vetrini per microscopio Superfrost PlusFisher Scientifico12-550-15Per la raccolta di sezioni cerebrali
VWR Micro Cover Glass 24 X 50 mmVWR48393241Per il montaggio di vetrini da microscopio
Thermo Scientific Filtro per siringa Nalgene 0,2 μmFisher ScientificoCodice 194-2520Per la sterilizzazione di soluzioni saline
Marcatori cutanei sterili a doppia punta di Viscot MedicalMedlineVIS1422SRL91Per segnare le coordinate sul cranio

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Infusione stereotassicaIppocampo di topoGiro dentatoCoordinate di BregmaCoordinate mediale lateraliCoordinate dorsale ventraliSiringa HamiltonTelaio stereotassicoModello di malattia di Alzheimer