Drosophila melanogaster è un sistema genetico e comportamentale del modello trattabile che è stato utilizzato per comprendere le basi molecolari e cellulari di molti importanti processi biologici per oltre un secolo 1. Drosophila è stata ben sfruttata per acquisire conoscenze in base genetica del comportamento mosca.
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Articolo metodologico
Metodi per test Drosophila Comportamento
In questo articolo
Sommario
Abstract
Drosophila melanogaster, il moscerino della frutta, è stato utilizzato per studiare i meccanismi molecolari di una vasta gamma di malattie umane come il cancro, malattie cardiovascolari e le varie malattie neurologiche 1. Abbiamo ottimizzato i test comportamentali semplici e robuste per la determinazione locomozione larvale, la capacità di arrampicata per adulti (test RING), e comportamenti di corteggiamento di Drosophila. Questi test comportamentali sono ampiamente applicabile per studiare il ruolo dei fattori genetici e ambientali sul comportamento fly. Capacità di scansione larvale può essere attendibilmente utilizzato per determinare i cambiamenti nelle fasi iniziali nelle abilità di larve striscianti Drosophila e anche per l'esame effetto di farmaci o geni di malattie umane (in mosche transgeniche) sul loro locomozione. Il saggio scansione larvale diventa più applicabile se l'espressione o la soppressione di un gene provoca mortalità negli stadi pupa o adulto, in quanto queste mosche non riescono a sopravvivere fino all'età adulta, dove altrimenti potrebbero essere valutati. Questo di base unssay può essere utilizzato anche in combinazione con la luce o di stress per esaminare ulteriori risposte comportamentali in larve di Drosophila. Comportamento di corteggiamento è stato ampiamente usato per studiare le basi genetiche del comportamento sessuale, e può essere utilizzato anche per esaminare l'attività e il coordinamento, così come l'apprendimento e la memoria. Corteggiamento Drosophila comporta la sostituzione di diversi stimoli sensoriali tra visivo, uditivo, e segnali chemosensoriali tra maschi e femmine che portano a una complessa serie di comportamenti motori ben caratterizzati che culminano in copula di successo. Saggi di arrampicata per adulti tradizionali (geotassi negativi) sono noiosi, lavoro intensivo, e richiede tempo, con variazioni significative tra i diversi studi 2-4. La rapida iterativo geotassi negativi (RING) saggio 5 ha molti vantaggi rispetto a protocolli più ampiamente impiegati, fornendo un approccio velocità riproducibile, sensibile, e di alta quantificare locomotore adulti e negative geotassi behaviors. Nel saggio RING, genotipi diversi o trattamenti farmacologici possono essere testati contemporaneamente utilizzando gran numero di animali, con l'high-throughput approccio rende più suscettibili per gli esperimenti di screening.
Protocollo
A. larvale Crawling Assay
1. Le larve Collection
- Impostare un 8 once bottiglia di mosche (10-15 maschi + femmine 10-15).
- Lasciate che le mosche depongono le uova per 24 ore, poi bottiglia trasparente di mosche. (Trasferire gli adulti in una nuova bottiglia e ripetere se necessario).
- Incubare bottiglia per 3-4 giorni, o fino terzo stadio larve sono visibili.
- Aggiungere 50 - 100 ml di 20% saccarosio alla bottiglia con larve e lasciate riposare per 20 minuti. Le larve saranno a galla.
- Raccogliere le larve con una pipetta 25 ml sierologico con la punta tagliata, e posto in un cesto in rete.
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Discussione
Drosophila comportamento è strettamente regolato da fattori genetici e ambientali. Noi, e altri, hanno già utilizzato i saggi descritti qui per raccogliere i dati per esaminare i geni legati a volare comportamenti e per la salute umana le malattie neurodegenerative modellati in Drosophila 5-19. Per il saggio strisciando, attenta selezione di 3 rd instar larve è un passo fondamentale. Se il trattamento con un farmaco, ci vorranno 10-15 minuti (o più a seconda del tipo e natura del .......
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Dichiarazioni
Non abbiamo nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Vorremmo ringraziare Astha Maltare per generare i dati crawling larvali. Vorremmo ringraziare il Dott. Nicholas Lanson Jr. per dare i suoi commenti sul manoscritto. Questo lavoro è stato sostenuto dal Centro Robert Packard per la SLA presso la Johns Hopkins (a UBP) e la sclerosi laterale amiotrofica Association (UBP) e R01MH083689 dal National Institutes of Mental Health (CDN).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Nome del reattivo | Azienda | Numero di catalogo | |
| Saccarosio | Fisher Scientific | S5-500 | |
| Agarosio | Invitrogen | 16500-500 | |
| 6 oz Drosophila bottiglia | Genesee Scientific | 32-130 | |
| Pennello (# 1) | Ted Pella, Inc. | 11859 | |
| Vola componenti alimentari | |||
| Farina di mais | Fisher Scientific | NC9109741 | |
| Agar | Genesee Scientific | 66-104 | |
| Melassa | Fisher Scientific | NC9349176 | |
| L'acido propionico | Acros | 14930-0010 | |
| Tegosept | Apice | 20-258 | |
| Etanolo | PescatoreScientifico | BP2818-4 | |
| Lievito | Genesee Scientific | 62-107 |
Riferimenti
- Pandey, U. B., Nichols, C. D. Human disease models in Drosophila melanogaster and the role of the fly in therapeutic drug discovery. Pharmacol. Rev. 63 (2), 411-436 (2011).
- Feany, M. B., Bender, W. W. A Drosophila model of Parkinson's disease. Nature Mar.
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Ristampe e permessi
