Descriviamo un metodo integrato per la precisione, l'impianto stereotassico di cellule umane di glioblastoma multiforme nel cervello di topi nudi e seriali successiva In vivo Immagini per monitorare la crescita e la risposta al trattamento degli xenotrapianti risultanti.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Stereotassica impianto intracranico e
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il glioblastoma multiforme (GBM) è un alto grado cancro al cervello primario con una sopravvivenza mediana di soli 14,6 mesi negli esseri umani nonostante norma tri-modalità di trattamento costituito da resezione chirurgica, post-operatorio radioterapia e temozolomide chemioterapia 1. Nuovi approcci terapeutici sono chiaramente necessari per migliorare la sopravvivenza dei pazienti e la qualità della vita. Lo sviluppo di strategie terapeutiche più efficaci sarebbe aiutato da modelli animali di GBM che ricapitolare malattia umana consente ancora di imaging di serie per monitorare la crescita del tumore e la risposta al trattamento. In questo articolo, descriviamo la nostra tecnica per l'impianto stereotassico precisa di cellule bio-GBM stampabili cancro nel cervello di topi nudi con conseguente xenotrapianti tumorali che ricapitolano principali caratteristiche cliniche della GBM 2. Questo metodo produce tumori che sono riproducibili e sono situati in sedi anatomiche precise, consentendo imaging in vivo bioluminescente di monitorare in serie intraxenotrapianto crescita cranica e la risposta ai trattamenti 3-5. Questo metodo è anche ben tollerato dagli animali con bassa morbilità e la mortalità perioperatoria.
Protocollo
A. pre-operatoria del tumore Preparazione cellulare
- Trasdurre cellule di glioblastoma multiforme U251 con un vettore di espressione lentivirali (pGreenFire, Sistema Biosciences) per esprimere stabilmente il gene della luciferasi lucciola.
- Queste cellule sono state coltivate in 10 ml di completa modifica Dulbecco di mezzo di Eagle (DMEM), che consiste in DMEM supplementato con 10% siero fetale bovino, 1% di penicillina-streptomicina, e 1% di amminoacidi non essenziali in una beuta T75 coltura tissutale incubando 5% di C0 2 e 37 ° C.
- Effettuare coltura cellulare standard, iniziando con lavaggio delle cellule con tampone fosfato....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
Il metodo di impianto stereotassico di cellule tumorali nei topi descritti nel presente documento genera riproducibile tumori che ragionevolmente ricapitolano il modello infiltrativa e rapida crescita del glioblastoma multiforme clinica 2, 6-8. Questa tecnica è particolarmente adatto per esperimenti stratificando topi uniformemente a diversi gruppi di trattamento dove i tumori riproducibili di dimensioni comparabili e proprietà biologiche e in specifiche sedi anatomiche sono desiderabili. L'impianto stere.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Ringraziamenti
Siamo grati al Dr. Andrew Hollander, Sara Davis, Lee Shuman, Tim Jenkins, e il Dr. Xu Xiangsheng per la loro assistenza di un esperto. Riconosciamo il sostegno del Dr. Ann Kennedy. BCB è stata sostenuta per la formazione di Grant Radiation Biology C5T32CA009677. JFD è stato sostenuto il Premio alla Carriera Burroughs Wellcome per gli scienziati medici (1.006.792). JLB è stato sostenuto in merito alla concessione melari (5 R25 CA140116-03). Si desidera ringraziare il Dott. Steve Hahn cui incoraggiamento e il sostegno ha contribuito a rendere la nostra ricerca possibile. Vorremmo anche ringraziare l'Università della Pennsylvania Nano-Bio Interface Center (NBIC) e i....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Descrizione | Fornitore | Numero di catalogo | Commenti |
| Digitale Solo per mouse strumento stereotassico | Stoelting | 51730D | Piattaforma stereotassica per l'impianto del mouse |
| Ketamina / xilazina | Anestesia iniettabile | ||
| Puralube Pomata Vet (oftalmica) | Amazon.com | Per prevenire l'essiccazione degli occhi del topo | |
| forare supporto per la piattaforma stereotassica | Stoelting | 51681 | |
| Micromotore Trapano elettrico | Stoelting | 51449 | Per la foratura attraverso il cranio |
| 0,45 millimetri carburo di punta | Stoelting | 514551 | |
| Tamponi di cotone sterili | Fisher Scientific | 23-400-100 | |
| Perle di vetro a secco sterilizzatore (germinator 500) | Braintree scientifico | GER-5287 | Per sterilizzare gli strumenti chirurgici di metallo |
| Mouse sonda rettale | Braintree scientifico | RET-3-ISO | Compatibile con il regolatore di temperatura |
| Centralina di temperatura (TCAT-2DF) | Harvard Apparatus | 727561 | Regolatore di temperatura per mantenere la temperatura dell'animale durante l'intervento chirurgico |
| Piastra riscaldante Piccolo | Harvard Apparatus | 727617 | Per l'uso con il regolatore di temperatura di riscaldamento del mouse durante l'intervento chirurgico. La piastra di riscaldamento si inserisce sotto il mouse sulla piattaforma stereotassica. |
| Bisturi monouso | BD Bard-Parker | 2015-11 | # 10 bisturi |
| 10 microlitri siringa | Hamilton | 7635-01 | Per l'iniezione delle cellule tumorali |
| 30 aghi calibro, 1 "di lunghezza, con punta piana | Hamilton | Vario | Deve essere compatibile con la siringa 10 pl |
| Nanomite programmabile pompa siringa | Harvard Apparatus | 704507 | Digital siringa motorizzata iniettore per il dispositivo stereotassico |
| Cellulosa spugne sterili lancia chirurgiche | Ultracell | 40410 | Per asciugare il campo operatorio |
| Bone cera | Ethicon | W31 | Per sigillare il foro cranico |
| Tissumend II tessuto adesivo sintetico assorbibile | Veterinary Laboratories Prodotti | 3002931 | Per sigillare l'incisione |
| Pompa acqua calda con il rilievo di riscaldamento | Gaymar | TP-650 | Topi scalda in periodo post-operatorio |
| IVIS Lumina II | Caliper Life Science | Bioluminescent imager | |
| D-Luciferin sale di potassio | Oro Biotecnologie | FORTUNA-1 | Luciferina per l'imaging bioluminescente |
Riferimenti
- Stupp, R. Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma. N. Engl. J. Med. 352, 987-996 (2005).
- Jacobs, V. L., Valdes, P. A., Hickey, W. F., De Leo, J. A. Current review of in vivo GBM rodent models: emphasis on the CNS-1 tumour model.
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
