Nella patogenesi di metastasi ossea, l'angiogenesi è un processo fondamentale e rappresenta quindi un bersaglio per l'imaging e la terapia. Qui vi presentiamo un modello di ratto del site-specific metastasi ossee cancro al seno e strategie per descrivere in modo non invasivo l'angiogenesi immagine In vivo Utilizzando la risonanza magnetica, tomografia computerizzata volumetrica e gli ultrasuoni.
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Articolo metodologico
Multi-modal Imaging di angiogenesi in un modello di ratto Nudo di metastasi ossee cancro al seno utilizzando la risonanza magnetica, tomografia computerizzata volumetrica e Ultrasuoni
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'angiogenesi è un elemento essenziale della crescita del tumore e la formazione di metastasi. In metastasi ossee, fattori angiogenici sono fondamentali per la proliferazione delle cellule tumorali nella cavità midollo osseo, nonché per l'interazione delle cellule tumorali e osso con conseguente distruzione ossea locale. Il nostro obiettivo era quello di sviluppare un modello di metastasi ossee sperimentale che permette di valutare in vivo l'angiogenesi nelle lesioni scheletriche con tecniche non invasive di imaging.
Per questo scopo, abbiamo iniettato 10 5 MDA-MB-231 cellule umane di cancro al seno in arteria epigastrica superficiale, che preclude la crescita di metastasi in altre aree del corpo rispetto alla rispettiva gamba posteriore 1. Dopo 25-30 giorni dopo l'inoculazione delle cellule tumorali, site-specific di sviluppare metastasi ossee, limitatamente al femore distale, tibia prossimale e prossimale del perone 1. Aspetti morfologici e funzionali di angiogenesi può essere studiata longitudinalmente in meta osseastasi che utilizzano la risonanza magnetica (MRI), tomografia computerizzata volumetrica (VCT) ed ecografia (US).
MRI mostra le informazioni morfologiche da parte dei tessuti molli delle metastasi ossee che viene inizialmente confinato alla cavità contenente il midollo osseo e supera successivamente l'osso corticale durante la progressione. Utilizzo di contrasto dinamico-enhanced MRI (DCE-MRI) funzionali compresi i dati del volume ematico regionale, la perfusione e permeabilità vasale può essere ottenuto e quantificati 2-4. Distruzione del tessuto osseo viene catturato in alta risoluzione utilizzando l'imaging morfologico VCT. Complementare ai risultati risonanza magnetica, le lesioni osteolitiche possono essere adiacente a siti di crescita del tumore intramidollare. Dopo l'applicazione di contrasto, VCT angiografia rivela l'architettura macrovessel nelle metastasi ossee in alta risoluzione, e DCE-VCT permette di comprendere a livello del microcircolo di queste lesioni 5,6. Degli Stati Uniti è applicabile per valutare le caratteristiche morfologiche e funzionali da lesioni scheletriche a causa diosteolisi locale di osso corticale. Utilizzando B-mode e le tecniche Doppler, la struttura e la perfusione dei tessuti molli metastasi possono essere valutati, rispettivamente. DCE-ci permette in tempo reale immagini di vascolarizzazione in metastasi ossee dopo l'iniezione di microbolle 7.
In conclusione, in un modello di site-specific ossa tumore al seno metastasi multi-modali tra cui tecniche di imaging MRI, VCT offerta degli Stati Uniti e le informazioni complementari sulla morfologia e parametri funzionali di angiogenesi in queste lesioni scheletriche.
Protocollo
1. Coltura cellulare
- Culture MDA-MB-231 cellule umane di carcinoma mammario (American Type Culture Collection) in RPMI-1640 (Invitrogen, Germania) supplementato con 10% FCS (Sigma, Germania). Tenere tutte le culture in condizioni standard (37 ° C, atmosfera umidificata, 5% di CO 2) e il passaggio delle cellule 2-3 volte a settimana per tenerli in crescita logaritmica. Per il modello animale descritto di seguito, non vi è alcuna necessità di utilizzo di osso-specifici sottolinee di MDA-MB-231 cellule, come il tasso di ripresa tumore è superiore al 90% 1.
- Raccogliere cellule tumorali sub-confluenti dopo utilizzando EDTA 2 mM i....
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Discussione
Il metodo per indurre metastasi ossea sperimentale qui presentato in combinazione con le procedure di imaging permettono di follow-up lesioni osteolitiche in ratti nudi longitudinalmente. Nel nostro modello, MDA-MB-231 cellule umane di cancro al seno sono iniettati nel mare che è una anastomosi tra l'arteria iliaca attraverso il tronco pudendoepigastric e l'arteria femorale. Di conseguenza, il flusso di sangue nella regione fornito dell'articolazione del ginocchio è mantenuta dopo la legatura del SEA. I vant.......
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Dichiarazioni
Non ci sono conflitti di interesse dichiarati.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato finanziato dalla Deutsche Forschungsgemeinschaft (SFB-TR 23 e TR SFB-79, TB e DK). Gli autori desiderano ringraziare Bangert Renate, Karin Leotta e Lisa Seyler per un'eccellente assistenza tecnica.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Nome del reattivo | Azienda | Numero di catalogo | |
| MDA-MB-231 delle cellule umane di cancro al seno | Type Culture Collection (ATCC) | HTB-26 | |
| RPMI-1640 | Invitrogen | 61870 | |
| FCS | Invitrogen | 10270 | |
| Tripsina-EDTA | Invitrogen | 25300 | |
| Carprofen Rimadyl | Pfizer | PZN 110208 | |
| Magnevist | Bayer-Schering | PZN 6961516 | |
| Imeron 400 MCT | Bracco | PZN 228654 | |
| SonoVue | Bracco | PZN 1567358 | |
| Papaverina | Alfa Aesar | L 04152 | |
| Isofluran | Baxter | HDG 9623 | |
| Symphony (risonanza magnetica) | Siemens | ||
| Volume CT (tomografia computerizzata volumetrica) | Siemens | ||
| Acuson Sequioa 512 (ultrasuoni) | Siemens-Acuson |
Riferimenti
- Bäuerle, T. Characterization of a rat model with site-specific bone metastasis induced by MDA-MB-231 breast cancer cells and its application to the effects of an antibody against bone sialoprotein. Int. J. Cancer. 115, 177-186 (2005).
- Merz, M., Komljenovic, D., Zwick, S., Semmler, W., Bäuerle, T.
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Ristampe e permessi
