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Articolo metodologico

Sintetico di produzione Spider Silk su scala di laboratorio

27.6K visualizzazioni

DOI:

10.3791/4191

18 luglio 2012

In questo articolo

Sommario

Nonostante le notevoli proprietà meccaniche e biochimiche di seta di ragno, questo materiale non può essere raccolto in grandi quantità con mezzi convenzionali. Qui descriviamo una strategia efficace per far girare fibre artificiali in seta di ragno, che è un processo importante per i ricercatori che studiano la produzione della seta di ragno e il loro uso come biomateriali di nuova generazione.

Abstract

Mentre la società progredisce e le risorse diventano più rari, sta diventando sempre più importante per coltivare nuove tecnologie che biomateriali ingegnere prossima generazione con caratteristiche ad alte prestazioni. Lo sviluppo di questi nuovi materiali strutturali deve essere rapido, conveniente e le metodologie di lavorazione e prodotti rispettosi dell'ambiente e sostenibili. Ragni tessono una moltitudine di diversi tipi di fibra con proprietà meccaniche diverse, offrendo una ricca fonte di materiale per la prossima generazione di ingegneria biomimicry che i rivali con i migliori materiali naturali o causati dall'uomo. Dato che la raccolta di grandi quantità di seta di ragno naturale è impraticabile, la produzione di seta sintetica ha la capacità di fornire agli scienziati l'accesso a una riserva illimitata di thread. Pertanto, se il processo di filatura può essere semplificato e perfezionato, ragno fibre artificiali hanno il potenziale utilizzo per una vasta gamma di applicazioni che vanno da giubbotti antiproiettile, sutura chirurgicas, corde e funi, pneumatici, corde per strumenti musicali, e compositi per l'aviazione e la tecnologia aerospaziale. Per far avanzare il processo di produzione della seta sintetica e per produrre fibre che visualizzano la varianza bassa nelle loro proprietà del materiale dallo spin a girare, abbiamo sviluppato una filatura a umido protocollo che integra l'espressione di proteine ​​ricombinanti in batteri seta di ragno, la purificazione e la concentrazione delle proteine , seguita da estrusione fibra e uno meccanico post-rotazione trattamento. Questa è la prima rappresentazione visiva che rivela un passo-passo processo a girare e analizzare fibre di seta artificiali su scala di laboratorio. Fornisce inoltre i dettagli per ridurre al minimo l'introduzione della variabilità tra le fibre filate dalla droga stessa filatura. Collettivamente, questi metodi spingerà il processo di produzione della seta artificiale, che porta alle fibre di qualità superiore che superano sete ragno naturali.

Introduzione

Seta di ragno ha straordinarie proprietà meccaniche che esegue i materiali artificiali, tra cui acciaio ad alta resistenza, Kevlar e Nylon. 1 ragni tessono almeno 6-7 diversi tipi di fibra che consentono di visualizzare le proprietà meccaniche diverse, ognuna progettata con quantità variabili di resistenza alla trazione ed estensibilità per eseguire specifici compiti biologici. 2 Ricercatori stanno rapidamente perseguendo l'uso della seta di ragno, come biomateriali di nuova generazione a causa delle loro eccezionali proprietà meccaniche, la loro biocompatibilità, e la loro natura non-tossico e il verde-materiale. 3,4 A causa del ....

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Protocollo

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Grafica Panoramica: Biomimicry del processo di filatura

Biomimicry del naturale percorso di produzione della seta di ragno:. Un percorso per la produzione di seta sintetica Questa immagine mostra la ghiandola principale ampullate dal globo d'oro tessitore, Nephila clavipes, ed i componenti utilizzati per la produzione di seta naturale (testo bianco). La regione coda sintetizza grandi quantità di proteine ​​della seta che vengono trasportati al ampolla, una regione di memorizzazione per la ....

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Discussione

Fibre sintetiche filate da questa metodologia sono meccanicamente dello stesso ordine di grandezza rispetto alle fibre naturali. Diminuendo la quantità di errore umano meccanizzare la roccatura e post processi di tiraggio di spin, la variazione tra i campioni sperimentali sono più controllata e notevolmente ridotto.

La nostra metodologia offre la possibilità di studiare le proprietà meccaniche di altre fibre che sono filate dalle proteine ​​ricombinanti codificate dai cDNA di altri membri de.......

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Dichiarazioni

Non ci sono conflitti di interesse dichiarati.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato supportato da NSF Grants RUI MCB-0950372 e DMR-1105310 dal titolo "Caratterizzazione molecolare di sete ragno vedova nera e comportamento meccanico di Spider Silks Colla", rispettivamente.

....

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Reagente / Attrezzature Azienda Numero di catalogo Comments
pBAD / TOPO ThioFusion Kit Expression Invitrogen K370-01
Contropiede Lysis Reagent Cell, 10x Promega V857C
Ni-NTA agarosio Qiagen 30210 Include le istruzioni per i buffer
ProteoSilver Argento Kit Stain Sigma-Aldrich PROTSIL1-1KT
FreeZone Liofilizzatore Labconco 7960041 FreeZone 12Plus
Esafluoroisopropanolo (HFIP) Sigma-Aldrich 52512
Siringa Hamilton 7657-01 250 pl
Ago Hamilton 7780-01 Gauge 26s, Blunt rimovibile fine dell'ago
Pompa a siringa Harvard Apparatus 702208 11Plus
Digital Caliper Carrera CP5906 0-150 mm Campo
Pinza in acciaio inox Mondo Strumenti di precisione 501764 Mini Dumont # M5S
Motore Nature Mill 7090529 12VDC, 2 rpm di velocità
Attuatore lineare Warner Electric 01-D024-0050-A06-LP-IP65 24VDC, range da 6 pollici
Dissezione microscopio Leica Microsystems Leica MZ16
Digital microscOpe fotocamera Leica Microsystems DFC320 Software: Leica Application Suite v2.8.1
Vännäs forbici Mondo Strumenti di precisione 500260
Microtensometer Aurora Scientific 310C 5N Dual-Mode Sistema

Riferimenti

  1. Gosline, J. M., Guerette, P. A., Ortlepp, C. S., Savage, K. N. The mechanical design of spider silks: from fibroin sequence to mechanical function. J. Exp. Biol. 202, 3295-3303 (1999).
  2. Foelix, R. Biology of spiders. , Oxford University Press. New York. (1996).
  3. Vollrath, F., Knight, D. P.

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Ristampe e permessi

Tag

Espressione di proteine ricombinantipurificazione delle proteineprotocollo di filatura a umidoestrusione di fibrestiramento post filaturatest meccanicianalisi SDS PAGEanalisi Western Blotmicroscopia elettronica a scansione