Stabilire un modello di tumore della vescica ortotopica per valutare gli effetti antitumorali di sarna via endovescicale consegnate e monitoraggio della crescita tumorale con l'ecografia e imaging bioluminescente.
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Articolo metodologico
Un modello ortotopico tumore della vescica e la valutazione del trattamento intravescicale sarna
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Presentiamo un nuovo metodo per il trattamento del cancro della vescica con attivante RNA via endovescicale consegnato piccolo (sarna) in un modello murino ortotopico eterotrapianto tumore della vescica. Il modello murino è stabilito dal cateterismo uretrale sotto anestesia generale per via inalatoria. Combustioni chimiche viene quindi introdotto alla mucosa della vescica utilizzando intravescicale soluzione di nitrato d'argento di distruggere lo strato di glicosaminoglicani vescica e permette alle cellule di allegare. Dopo alcuni lavaggi con acqua sterile, cancro della vescica umana KU-7-luc2-GFP cellule sono instillati attraverso il catetere in vescica di sosta per 2 ore. Successiva crescita dei tumori vescicali è confermata e monitorata da ecografia vescicale in vivo e di imaging bioluminescente. I tumori vengono poi trattati per via endovescicale con sarna formulata in nanoparticelle lipidiche (LNPs). La crescita del tumore è monitorata con gli ultrasuoni e la bioluminescenza. Tutte le fasi di questa procedura sono illustrati nel video allegato.
Protocollo
Procedure che coinvolgono soggetti animali sono stati approvati dal Animal Care istituzionale e Comitato uso (IACUC) presso l'University of California, San Francisco.
1. Preparazione cellulare
- La linea di carcinoma della vescica umana cellule KU-7-luc2-GFP (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA) viene coltivato in RPMI-1640 integrato con 10% siero fetale bovino e 50 ug / ml di gentamicina.
- Le colture vengono mantenute a 37 ° C, 5% CO 2 con mezzi cambia ogni due o tre giorni.
- Le cellule sono state raccolte mediante digestione con tripsina e contate con un emocitometro. Una sospensione singola ce....
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Discussione
Vi presentiamo un protocollo per l'istituzione di un modello murino ortotopica tumore della vescica xenotrapianto seguito da un trattamento intravescicale dei tumori con sarna LNP formulato che bersaglia il promotore di CIP1/WAF1 p21 (p21) per l'attivazione della trascrizione. 2, 3 I tumori risultanti possono essere confermata e monitorata con immagini e bioluminescenti ultrasuoni vescica. Modelli ortotopica può essere superiore a intraperitoneale, sottocutanea, endovenosa o modelli fornend.......
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Dichiarazioni
LCL è un inventore di nome in attesa di domande di brevetto relative a sarna che siano stati presentati dalla University of California San Francisco e concesso in licenza a Alnylam Pharmaceuticals.
Ringraziamenti
Questa ricerca è finanziata dalla vescica AACR Henry Shepard Cancer Research Grant (09-60-30-LI).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Nome del reattivo | Azienda | Numero di catalogo | Commenti (opzionale) |
| KU-7-luc-GFP le cellule | Pinza | 128091 | |
| timici topi nudi (nu / nu) | Simonsen Laboratories | 6-7 settimane | Sim: (NCR) nu / nu fisol |
| Ultrasuoni unità | Visualsonics | Vevo 770 | RMV-704 sonda |
| Bioluminescenza unità | Pinza | IVIS Spectrum | |
| Exel safelet catetere | Pescatore | 14-841-21 | 24G X ¾ " |
| Di nitrato d'argento | Sigma | S8157 | |
| Hamilton siringa | Hamilton company | 80301 | |
| LNP-sarna | Alnylam Pharmaceuticals |
Tabella 1. Reagenti e attrezzature specifiche.
Riferimenti
- Semple, S. C. Rational design of cationic lipids for siRNA delivery. Nature. 28, 172-176 (2010).
- Li, L. C. Small dsRNAs induce transcriptional activation in human cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United St....
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Ristampe e permessi
