I modelli animali sono spesso utilizzati per studiare metastasi alle ossa. In questo protocollo si descrivono due metodi comuni di inoculo del tumore per gli studi di metastasi ossee e descrivere brevemente alcune delle analisi utilizzati per monitorare e quantificare questi modelli.
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Articolo metodologico
Modelli di metastasi ossee
In questo articolo
Sommario
Abstract
Le metastasi ossee sono un evento comune in tumori maligni, tra cui mammella, della prostata e del polmone. Una volta stabilito in osso, i tumori sono responsabili di morbilità e mortalità significative 1. Quindi, vi è una grande necessità di comprendere i meccanismi molecolari che controllano la crescita, creazione e l'attività di tumori in osso. Diversi modelli in vivo sono stati istituiti per studiare questi eventi e ognuno ha vantaggi e limiti specifici. Il modello più comunemente usato utilizza inoculazione intracardiaca delle cellule tumorali direttamente nella fornitura di sangue arterioso atimici (nudo) topi BalbC. Questo procedimento può essere applicato a molti diversi tipi di tumore (inclusi PC-3 cancro alla prostata, carcinoma del polmone, e topo tumori mammari cuscinetto di grasso), tuttavia, in questo manoscritto ci concentreremo sul modello di cancro al seno, MDA-MB-231. In questo modello ci avvaliamo di un clone molto osso-selettivo, originariamente derivato nel gruppo Dr. Mundy a San Antonio 2, che hda allora è stato transfettate per l'espressione GFP e ri-clonato dal nostro gruppo 3. Questo clone è una variante osseo metastatico con un alto tasso di osteotropism e metastasi poco da polmone, fegato, o ghiandole surrenali. Mentre iniezioni intracardiaci sono più comunemente utilizzati per gli studi di metastasi ossee 2, in alcuni casi, intratibial 4 o mammaria iniezioni di cuscinetto adiposo sono più appropriati. Iniezioni intracardiaci sono tipicamente eseguite utilizzando cellule tumorali umane con l'obiettivo di monitorare le fasi successive di metastasi, in particolare la capacità delle cellule tumorali di arrestare in osso, sopravvivere, proliferare, e stabilire tumori che si sviluppano in tumore-indotta malattia ossea. Intratibial iniezioni vengono eseguite se concentrandosi sul rapporto delle cellule tumorali e ossee dopo un tumore ha metastatizzato alle ossa, che è correlato o meno una costante malattia metastatica ossea. Nessuno di questi modelli ricapitola primi passi nel processo metastatico prima di embolia e l'ingressodi cellule tumorali nella circolazione. Se monitorare la crescita del tumore primario o metastasi dal sito primario alle ossa, poi mammarie vaccinazioni cuscinetto adiposo sono in genere preferito, tuttavia, pochissimi linee cellulari tumorali in modo coerente metastasi alle ossa dal sito primario, con 4T1 osso preferenziali cloni, un mouse mammaria carcinoma, essendo l'eccezione 5,6.
Questa procedura dettagli inoculazione manoscritti e le fasi principali evidenzia nelle analisi post-inoculazione. In particolare, include colture cellulari, cellule tumorali procedure di inoculazione di vaccini intracardiaci e intratibial, così come brevi informazioni riguardo monitoraggio settimanale di raggi X, fluorescenza e analisi istomorfometrici.
Protocollo
1. Cella di manutenzione
- Subcloni ossa molti metastatici di MDA-MB-231 esistono che hanno propensione variabile per la colonizzazione e la crescita ossea. Per i nostri esperimenti usiamo un clone derivato dal GFP-etichettato MDA-MB-231 sviluppato UTHSCA 2. Questo particolare sub-clone formerà visibili lesioni osteolitiche a circa 3 dopo inoculazione settimane, con sacrificio a 4 settimane.
- Mantenere le cellule in DMEM contenente 10% FBS e 0,1 mg / ml di penicillina-streptomicina a 37 ° C nel 5-8% CO 2 7.
- Cellule passaggio a 80-90% di confluenza e ri-piastra ad una diluizione 1:10 (questo varia a seconda ....
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Discussione
Studi di tumore-indotta malattia ossea contare su diversi modelli animali di cui i due più comunemente utilizzati sono inoculazioni intracardiaci e intratibial. In molti casi intracardiaca è l'opzione migliore per lo studio di metastasi alle ossa, tuttavia, non rappresenta l'intero processo metastatico e quindi cuscinetto adiposo mammario o altre iniezioni ortotopici dovrebbero idealmente essere utilizzati verso quella fine. Le cellule tumorali non metastatizzare rapidamente dal sito primario nella maggior parte.......
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Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Ringraziamenti
Gli autori riconoscono le seguenti fonti di finanziamento: P01CA040035 (FE / JAS) e VA Career Development Award (JAS).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Nome del reagente | Azienda | Numero di catalogo | |
| MDA-MB-231 cellule umane di cancro al seno | Originariamente ATCC-Internamente clonato e selezionato | ||
| DMEM | GIBCO | 11885 | |
| PBS | Mediatech Inc | 21-040-CV | |
| FBS | Atlas biologica | F-0050a | |
| Tripsina | GIBCO | 15400 | |
| Faxitron | Faxitron | ||
| Maestro | CRi | ||
| μCT scanner | Scanco | ||
| Topi nudi atimici | Harlan | Fox nu - / - | |
| Siringhe da insulina (300 ml, 28,5 g) | Becton Dickinson | 309300 | |
| IVIS | Pinza | ||
| Roditori dieta irradiata | Teklad | 2920x |
Riferimenti
- Sterling, J. A., Edwards, J. R., Martin, T. J., Mundy, G. R. Advances in the biology of bone metastasis: how the skeleton affects tumor behavior. Bone. 48, 6-15 (2011).
- Yoneda, T., Sasaki, A., Mundy, G. R. Osteolytic bone metastasis in breast cancer. Breast Cancer Res. Treat
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Ristampe e permessi
