Ricorrente cheratite erpetica Stromal in Mouse, un modello per lo studio HSK umano

Sommario

La maggior parte degli studi sulla malattia erpetica corneale utilizzare un modello di infezione primaria. Tuttavia, l'infezione primaria con HSV-1 non tipicamente portare a malattie umane. Qui si descrive un modello ricorrente della malattia erpetica corneale, che più da vicino imita malattia umana.

Abstract

Malattie degli occhi erpetica, chiamato cheratite erpetica stromale (HSK), è un'infezione potenzialmente accecante della cornea che si traduce in oltre 300.000 visite cliniche ogni anno per il trattamento. Tra 1 e 2 per cento di quei pazienti con malattia clinica sperimenterà perdita della vista della cornea infetto. La grande maggioranza di questi casi sono il risultato di riattivazione di una infezione latente da herpes simplex virus di tipo I e non causa di malattia acuta. È interessante notare che l'infezione acuta è il modello più utilizzato per studiare questa malattia. Tuttavia, si è ritenuto che un modello ricorrente di HSK sarebbe più riflettente di ciò che avviene durante la malattia clinica. I modelli animali ricorrenti per HSK hanno utilizzato entrambi i conigli e topi. Il vantaggio di conigli è che essi sperimentano riattivazione dalla latenza in assenza di qualsiasi stimolo noto. Detto questo, è difficile esplorare il ruolo che molti fattori immunologici giocare in HSK ricorrenti in quanto il modello di coniglio non ha la immungici e le risorse genetiche che il mouse ha. Abbiamo scelto di utilizzare il modello di topo per HSK ricorrenti in quanto ha il vantaggio che vi siano molte risorse disponibili e anche sapere quando riattivazione avverrà perché riattivazione è indotta da esposizione a luce UV-B. Finora, questo modello ha permesso a tali laboratori di utilizzarlo per definire diversi fattori immunologici che sono importanti per questa malattia. Ha inoltre permesso di testare sia terapeutica e l'efficacia del vaccino.

Protocollo

Cura degli animali Nota: Gli analgesici non sono utilizzati in questo modello in quanto sono anti-infiammatori e quindi si invaliderebbe il modello.

1. Preparazione di virus

1. Grow HSV-1 su cellule Vero (80% confluenti) utilizzando una diluizione iniziale di 0,01 molteplicità di infezione (in T-150 beuta, circa 5 x 10 ⁵ unità formanti placca) per 3-4 giorni finché tutte le celle sono arrotondate-up e sono facilmente sloggiato colpendo il pallone.
2. Rimuovere i supporti per provette da centrifuga e centrifugare a sterili Sorvall Leggenda RT a 4 ° C e 3.500 rpm per 15 min. Dopo aver rimosso il surnatante (vedi 1.3),....

Discussione

Il modello ricorrente di erpetica cheratite stromale (HSK) qui descritto consente al ricercatore di studiare HSK umano in un modello che è più coerente con quella che si osserva durante la malattia umana. Così, i punti di forza del modello sono che la malattia si verifica nel contesto di un sistema immunitario che ha già da stimolati durante la malattia primaria. Poiché questi topi già hanno una risposta immunitaria a HSV-1, i fattori che riattivano risposta immunitaria che sono probabilmente diverse da quelle che origi.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
DMEM	Sigma	D5796
Serum bovino fetale	Atlanta Biologicals	S11150
Serum umano	Sigma	S7023
L-Glutammina	Cellgro	25-005-C1
Penicillina/Streptomicina	Sigma	P4333
Fungizone	Invitrogen	15290018
Centrifuga	Sorvall	Legend RT
Centrifuga	Beckman	52-21
Transilluminatore	UVP	95-0452-02
Sonicator	Branson	Sonifier 450
Tubi Oak Ridge	Nalgene	Z 720410
Flaconi - 7150	Corning	430823
Piastre - 12 pozzetti	Corning	CLS 3513
Piastre - 48 pozzetti	Corning	CLS 3548
Tubi conici sterili - 30 ml	Corning	CLS 430828
Astucci sterili con estremità in cotone	Fisher	23-400-125
Aghi 30G	Becton-Dickinson	305106
Aghi 25G	BD	305122
Siringa da 10 ml	BD	309602
Siringa da 10 ml	BD	309604