Insulina Microiniezione ippocampale e<em&gt; In vivo</emMicrodialisi&gt; Durante il test di memoria spaziale

Sommario

Modulazione di hippocampally-dipendente memoria spaziale di lavoro diretto microiniezione intrahippocampal, accompagnato e seguito da In vivo per i metaboliti in animali coscienti che si comportano.

Abstract

Il metabolismo del glucosio è un marker utile per la locale attività neurale, che costituiscono la base di metodi come 2-desossiglucosio e la risonanza magnetica funzionale. Tuttavia, l'uso di tali metodi in modelli animali richiede l'anestesia e, quindi, sia altera lo stato del cervello e impedisce misure comportamentali. Un metodo alternativo è l'uso di microdialisi in vivo per prendere la misura continua delle concentrazioni nel liquido extracellulare del cervello di metaboliti del glucosio, lattato, e relativi in Svegliatevi, animali sfrenato. Questa tecnica è particolarmente utile quando combinato con compiti destinate a ricorrere specifiche regioni cerebrali acute e / o manipolazione farmacologica, ad esempio, le misure ippocampali durante un compito di memoria di lavoro spaziale (alternanza spontanea) mostrano un tuffo in glucosio extracellulare e aumento della lattato che sono indicativo di ^1,2 glicolisi maggiore, e somministrazione di insulina intrahippocampal sia migliora la memoria e aumenta glicole ippocampalelisi ^3. Sostanze come l'insulina può essere consegnato ippocampo tramite la sonda microdialisi stesso utilizzato per misurare metaboliti. L'uso di alternanza spontanea come una misura della funzione ippocampale è stato progettato per evitare di confondere motivatori stressanti (ad esempio footshock), ritenuta, o ricompense alimentari (ad esempio), ciascuno dei quali può alterare sia le prestazioni delle applicazioni e il metabolismo; questa attività fornisce anche un misurare dell'attività motoria che consente il controllo di effetti non specifici del trattamento. Combinati, questi metodi permettono la misurazione diretta delle variabili neurochimiche e metaboliche che regolano il comportamento.

Protocollo

1. Chirurgia Preparazione

1. Gestione. Animali (più comunemente, ratti o topi, anche se il metodo di microdialisi e la combinazione con il test comportamentale è in gran parte di carattere generale con qualsiasi specie-specifici necessari adattamenti necessari, ad esempio per l'anestesia) sono trattati per un minimo di 10 min / giorno per almeno due giorni prima di un intervento chirurgico. Manipolazione estensiva ha dimostrato di lasciare animali in uno stato riposo al momento del test, evitando confondere possibile ^2,4,5. Useremo i ratti nel corso di questo protocollo come una specie di esempio. Movimentazione deve avvenire senza str....

Risultati

Ratti dovrebbe recuperare rapidamente da un intervento chirurgico e di essere attenti, mobili e attiva entro 30 minuti dopo la cessazione di anestesia. L'impatto del tappo cannula deve essere minimo se l'operazione viene eseguita in modo pulito e minimal cemento dentale viene utilizzato. Se uno qualsiasi segno di infezione si nota durante il monitoraggio post-operatorio, o il ratto è in alcun modo mostrare segni di sofferenza o disagio, interrompere immediatamente l'esperimento, questo dovrebbe essere estrem.......

Discussione

Tutte le soluzioni utilizzate in microdialisi deve essere filtrata immediatamente prima dell'uso, utilizzando un filtro di 0,2 micron. Dopo l'inserimento della sonda nella cannula guida, osservare per confermare che il flusso è libero e la raccolta del campione è in corso. Se il flusso si interrompe dopo l'inserimento, la causa più probabile è un danno alla membrana della sonda causata da insufficiente attenzione all'inserimento, e una sonda fresca deve essere sostituito.

Com.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
			La maggioranza dei reagenti sono a livello di laboratorio standard e può essere ottenuto da un fornitore di scelta. Allo stesso modo, apparecchiature come pompe a siringa e tubi possono essere utilizzati da qualsiasi di vari produttori. Elementi specifici utilizzati qui per i cui dettagli sono importanti includono:
CMA 12 microdialisi sonde	CMA / microdialisi	CMA-12-XXX	Questi sono disponibili in lunghezze diverse membrane e tagli, indicati dai codici specifici nel 'XXX'.
L'insulina umana (Humulin)	Eli Lilly	N / a
Girevole Liquid	Instech	375/D/22QM	Questa specifica girevole ha una coppia molto bassa e volume interno, così come un nonreactive rivestimento quarzo.