Qui descriviamo una delle cellule di Schwann (SC) saggio transizione, in cui SC sono in grado di sviluppare lungo gli assoni si estendono.
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Articolo metodologico
Analizzando lo sviluppo delle cellule di Schwann Murine lungo gli assoni in crescita
In questo articolo
Sommario
Abstract
Lo sviluppo dei nervi periferici è un processo intrigante. I neuroni inviano assoni per innervare obiettivi specifici, che negli esseri umani sono spesso più di 100 cm di distanza dal soma del neurone. Sopravvivenza neuronale durante lo sviluppo dipende destinazione fattori di crescita derivati ma anche sul supporto di cellule di Schwann (SC). A questo fine assoni ensheath SC della regione del soma neuronale (o il passaggio dalla centrale per il sistema nervoso periferico) alla sinapsi o giunzione neuromuscolare. Le cellule di Schwann sono derivati della cresta neurale e la migrazione come precursori lungo gli assoni emergenti fino a quando l'assone è coperto con SCS. Ciò dimostra l'importanza di SC migrazione per lo sviluppo del sistema nervoso periferico e sottolinea la necessità di studiare questo processo. Al fine di analizzare lo sviluppo SC, una messa a punto è necessario che accanto alle SC comprende anche la loro substrato fisiologico per la migrazione, l'assone. Grazie allo sviluppo intrauterino (mus musculus). Per ovviare a questo, abbiamo adattato il ganglio cervicale superiore (SCG) tecnica di espianto. Dopo il trattamento con il fattore di crescita nervosa (NGF) espianti SCG estendere assoni, seguiti da precursori SC migrano lungo gli assoni dal ganglio alla periferia. La bellezza di questo sistema è che la SC sono derivati da un pool di SC endogena e che migrano lungo i loro assoni proprie fisiologici che crescono contemporaneamente. Questo sistema è particolarmente interessante, in quanto lo sviluppo SC lungo gli assoni possono essere analizzati con time-lapse imaging, aprendo ulteriori possibilità di acquisire conoscenze in migrazione SC.
Protocollo
1. Preparazione del gel di collagene
- Preparare un mezzo magazzino, contenente 455 microlitri MEM 10x, 112 microlitri NaHCO 7,5% 3, 50 microlitri glutammina e NaOH. La concentrazione e la quantità di NaOH dipende dalla coda di topo preparazione collagene (vedere 1.2), il volume finale del mezzo magazzino essendo 1.000 microlitri.
- Preparare coda di topo collagene secondo Ebendal (1). Conservare la soluzione di collagene a 4 ° C. Una degradazione del collagene soluzione non poteva essere osservato. Dopo la preparazione di un nuovo gruppo, valutare la concentrazione di NaOH necessaria per il mezzo stock (vedere 1.1). Utili....
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Risultati
Crescita assonale è facilitato dal SCG espianti seguito al trattamento con NGF (4) (regime film S1 Figura 1 schema). Questo processo è facilmente visibile da qualsiasi microscopio invertito e può essere seguito da time-lapse imaging (film S2). Se uno scienziato è una novità per la dissezione SCG da embrioni di topo si consiglia vivamente una validazione della tecnica da un semplice anti-tirosina idrossilasi (TH) immunoistochimica. TH è un marker comune per i neuroni catecolamine (in que.......
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Discussione
Lo sviluppo del sistema nervoso periferico è un processo eccitante. Quando l'elaborazione è completata, assoni sono ensheathed da SCS per tutta la lunghezza, che può, in esseri umani, spesso oltre 100 cm. A tal fine il numero corretto dei SCs necessari deve essere stabilito durante lo sviluppo e la SCS devono anche muoversi lungo assoni si estendono verso la periferia per garantire la copertura completa assonale. Questo vale per assoni unmeylinated mielinizzati ma anche per. In entrambi i casi tutti assoni sono in c.......
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Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Ringraziamenti
Vogliamo ringraziare Arumae Urmas per la condivisione di un protocollo di collagene e Jutta Fey e Ursula Hinz per un'eccellente assistenza tecnica. Inoltre vogliamo ringraziare Christian F. Ackermann, Ulrike Engel e la Nikon Imaging Center presso l'Università di Heidelberg e anche per Joachim Kirsch aiuto gentile per il Shoting video. Il lavoro è stato parzialmente finanziato attraverso la Deutsche Forschungsgemeinschaft (SFB 592).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Nome del reagente / materiale | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
| MEM 10x | Gibco | 21430 | |
| Bicarbonato di Sodio (7,5%) | Gibco | 25080 | |
| Glutammina | Gibco | 25030 | |
| NaOH | Merck | 109137 | |
| NGF | Roche | 1058231 | R & S # 556-NG-100 |
| Medio Neurobasal | Gibco | 21103 | |
| B27 Supplemento | Gibco | 17504 | |
| antibiotici | Gibco | 15640 | |
| d-PBS | Gibco | 14040 | |
| aghi insetti | FST | 26002-20 | |
| siringa con ago | Braun | BD # 300013 | |
| 8 Fare scorrere camera ben | Lab tek | 177402 |
Riferimenti
- Ebendal, T. Use of collagen gels to bioassay nerve growth factor activity. Rush, R. A. IBRO Handh, John Wiley & Sons Ltd. (1989).
- Heermann, S., SchmÃcker, J., Hinz, U., Rickmann, M., Unterbarnscheidt, T., Schwab, M. H., Krieglstein, K. Neuregulin 1 type III/ErbB signaling....
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Ristampe e permessi
