Impianto di cellule tumorali nell'organo di origine può servire come un modello preclinico utile per valutare nuove terapie. Cellule di carcinoma della vescica MB49 possono essere coltivate all'interno della vescica seguente instillazione intravescicale. Questo protocollo dimostra cateterizzazione della vescica topo a scopo di impianto tumorale e consegna adenovirale.
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Articolo metodologico
Un ortotopico cancro della vescica Modello di Gene Studi di consegna
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il cancro della vescica è il secondo tumore più comune del tratto urogenitale e nuovi approcci terapeutici che possono ridurre la recidiva e la progressione sono necessari. Il microambiente tumorale può influenzare significativamente lo sviluppo tumorale e risposta alla terapia. È pertanto spesso desiderabile crescere le cellule tumorali nell'organo da cui sono derivati. Questo protocollo descrive un modello ortotopico di cancro della vescica, in cui murine cellule di carcinoma della vescica MB49 sono instillato nella vescica tramite cateterizzazione. Impianto di cellule tumorali successo in questo modello richiede interruzioni dello strato protettivo glicosaminoglicani, che può essere effettuata con mezzi fisici o chimici. Nel nostro protocollo vescica viene trattata con tripsina prima dell'instillazione cella. Cateterizzazione della vescica può anche essere usati per fornire terapie una volta che i tumori sono stabiliti. Questo protocollo descrive la consegna di un costrutto adenovirale che esprime un gene reporter luciferasi. Mentre oprotocollo ur è stato ottimizzato per studi a breve termine e si concentra sulla consegna del gene, la metodologia di topo cateterismo vescicale ha vaste applicazioni.
Introduzione
Il cancro della vescica è il secondo tumore più comune del tratto urogenitale con circa 75.000 nuovi casi e 15.000 decessi attesi nel 2012 1. Alti tassi di recidiva richiedono follow-up permanente, che rende il cancro della vescica uno dei tumori più costoso da trattare. Cancro della vescica che ha invaso lo strato muscolare può metastatizzare fegato, polmone o osso attraverso il sistema linfatico. La terapia multimodale dei tumori avanzati risultati solo nel 20-40% di sopravvivenza dopo 5 anni. Pertanto, sono urgentemente necessarie strategie di trattamento efficaci volti a ridurre la recidiva e la progressione del tumore superficiale della vescica, nonch....
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Protocollo
Tutte le procedure che coinvolgono gli animali sono stati esaminati e sono stati approvati dal Comitato Istituzionale cura degli animali ed uso presso la Medical University of South Carolina. Il protocollo è stato approvato in base USDA categoria D per il dolore.
1. Impianto cellulare
- Due giorni prima di eseguire la procedura, piatto 1 x 10 6 MB49 cellule in T-25 palloni. Utilizzare alta DMEM glucosio supplementato con 10% FBS (e antibiotici, se lo si desidera). Una beuta è sufficiente per ciascun gruppo di fino a cinque topi che verrà anestetizzato e impiantato in parallelo.
- Il giorno della procedura, prep....
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Risultati
Ematuria è osservato in quasi tutti i topi entro 8 giorni dopo l'impianto di 200.000 MB49 cellule. Come mostrato in Figura 1, peso vescica è più del doppio di 34,7 ± 3,3 mg (range 31-37 mg, n = 4) in topi non tumorali cuscinetto a 87,5 ± 19,2 mg (range 77-120 mg, n = 10) in topi che sono stati impiantati con MB49 cellule. In termini di consegna del gene, abbiamo trovato che l'imaging topi 24 ore dopo l'instillazione virale produce un segnale più forte dopo 48 ore (Figura 2)........
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Discussione
La metodologia primario descritto in questo protocollo è cateterizzazione di vesciche topo, che ha applicazioni di massima per instillazione di cellule o di qualsiasi agente destinati per il recapito locale all'epitelio vescicale. Il protocollo specifica di cui sopra è stato ottimizzato per studi a breve termine (~ 10 giorni). Impiantare il numero esatto delle cellule è fondamentale, dal momento che un elevato numero di cellule si tradurrà in più rapida crescita del tumore e possibile perdita di animali a causa dell.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari in competizione.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto da NIH R21 CA143505 a Christina Voelkel-Johnson.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Nome del reagente | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
| Topi femmina di 6-8 settimane | Jackson Laboratories | Nome ceppo: C57BL/6J Numero di stock: 000664 | < |
| p>Tripsina* | MediaTech | MT25-053-CI | Ottenuto tramite Fisher |
| DMEM* | MediaTech | MT10-017-CV < | p>Ottenuto tramite Fisher |
| FBS | Hyclone | SH30071.03 | Inattivato a caldo |
| T25 matracchette* | Corning Costar | Corning No.:3056 Fisher: 07-200-63 | Ottenuto tramite Fisher |
| MB49 cellule | N/A | N/A | Ottenuto dal Dr. Boehle (vedi riferimento11) |
| Puralube Vet Unguento* | Pharmaderm | Henry Schein Company No.:036090-6050059 Fisher: NC9676869 | Ottenuto tramite Fisher < |
| p>Crema depilatoria: Veet | farmacia locale | ||
| Lubrificante: K-Y Jelly | farmacia locale | ||
| Cateteri* | Exel International | Exel International No.:26751; Fisher: 14-841-21 | Ottenuto tramite Fisher |
| Isoflurano | Terrell | NDC 66794-011-25 | Ottenuto tramite farmacia ospedaliera |
| 1 ml siringhe TB con punta a scorrimento | Becton Dickinson | BD309659 Fisher:14-823-434 | |
| D-Luciferina | Biotecnologie dell'oro | L-123-1 | |
| Ad-CMV-Luc | VectorBiolabs | 1000; Richiedi amplificazione e purificazione di CsCl su larga scala per in vivo uso | Agente infettivo che richiede il contenimento di BSL2 |
| Steady-Glo Sistema di dosaggio della luciferasi | Promega | E2510 (10 ml), E2520 (100 ml) o E2550 (10 x 100 ml) | |
*disponibile presso diversi fornitori | |||
EQUIPMENT | |||
| Sistema per anestesia | E-Z Systems, Euthanex Corporation | Sistema per anestesia: EZ7000 5 porte dispositivo di respirazione del mouse: EZ109 | Ottenuto tramite Fisher |
| Xenogen IVIS 200 | Caliper Life Sciences | http://www.caliperls.com/products/preclinical-imaging/ivis-imaging-system-200-series.htm | |
| FLUOstar Optima | BMG Labtech | http://www.bmglabtech.com/products/microplate-reader/instruments.cfm?product_id=2 |
Riferimenti
- Siegel, R., Naishadham, D., Jemal, A. Cancer statistics, 2012. CA Cancer. J. Clin. 62 (1), 10-29 (2012).
- Seager, C. M., Puzio-Kuter, A. M., et al. Intravesical delivery of rapamycin suppresses tumorigenesis in a mouse model of progressive bladder cancer. Canc....
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Ristampe e permessi
