Parabiotic unione di due organismi porta allo sviluppo di un sistema circolatorio condiviso. In questo protocollo, si descrivono i passaggi chirurgici per formare una connessione parabiotic tra un topo wild-type e una costitutiva GFP che esprimono mouse.
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Articolo metodologico
Parabiosis in topi: un protocollo dettagliato
In questo articolo
Sommario
Abstract
Parabiosis è l'unione chirurgica di due organismi che permettono la condivisione della circolazione sanguigna. Allegando la pelle di due animali promuove la formazione di microcircolo nel sito di infiammazione. Partner Parabiotic condividere i loro antigeni circolanti e quindi sono privi di reazione immunitaria avversa. In primo luogo descritto da Paul Bert nel 1864 1, l'intervento parabiosis è stata affinata per Bunster e Meyer nel 1933 per migliorare la sopravvivenza degli animali 2. Nel protocollo corrente, due topi sono chirurgicamente uniti dopo una modifica della Bunster e tecnica Meyer. Gli animali sono collegati attraverso il gomito e del ginocchio seguita da attacco della pelle permettendo il supporto costante che impedisce sforzo sulla pelle suturata. Qui, descriviamo in dettaglio la parabiotic unione di un GFP onnipresente che esprime il mouse per una wild type (WT) del mouse. Due settimane dopo la procedura, la coppia viene separata e cellule positive GFP può essere rilevata mediante analisi citofluorimetrica nel cir sangueione del mouse WT. Il chimerismo sangue permette di esaminare il contributo delle cellule circolanti da un animale nell'altro.
Introduzione
Parabiosis, la chirurgica unione di due organismi, è stato descritto nel 1864 da Paul Bert come un modo per sviluppare un modello per studiare sistemi circolatorio condivisi e consisteva l'unione della pelle e pareti muscolari dei due topi 1. Parabiosis promuove la formazione del microcircolo nel sito di infiammazione 3 e ha avuto diverse applicazioni in studi fisiologici, come la comunicazione ormonale tra l'ipofisi e gonadi nonché il ruolo del rene nell'ipertensione 4. È stato inoltre impiegato per investigare l'assunzione e integrazione di cellule progenitrici in neovascolarizzazione 5, migrazione di cell....
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Protocollo
Tutti gli studi sugli animali sono stati eseguiti secondo le linee guida di cura degli animali e l'uso del comitato di UCLA e il National Institutes of Health Guide per la cura e l'uso di animali da laboratorio. La durata della procedura descritta di seguito è di circa 45-60 minuti dall'inizio alla fine.
1. Preparazione del campo operatorio
- Eseguire la procedura in una sala operatoria degli animali pulita.
- Equipaggiamento: isoflurano vaporizzatore, Gaymer Pompa T con il rilievo di riscaldamento.
- Strumenti sterili: due pinze, forbici curve sottili, porta aghi.
- Guanti sterili devono esser....
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Risultati
Il risultato atteso di parabiosis di due organismi è il pari contributo di sistema circolatorio di ogni animale ad una circolazione sanguigna comune (Figura 2). Si può facilmente verificare l'equilibratura con successo il sangue del parabiosed WT e topi GFP positive con l'analisi di citometria di flusso. Qui, il sangue venoso è stato ottenuto dalle code di entrambi parabionts a 2 settimane dopo l'intervento chirurgico e stato frazionato per le cellule del sangue periferico (per escludere eri.......
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Discussione
Il metodo parabiosis discusso qui presenta difficoltà tecniche minime e si traduce in tassi di mortalità bassi. Il fissaggio delle articolazioni del ginocchio e del gomito è un miglioramento significativo della Bunster e tecnica Meyer. Tuttavia, la procedura rimane così invasiva mantenimento di condizioni di sterilità durante l'intervento chirurgico è imperativo. Per prevenire ulteriori infezioni del sito chirurgico, è importante che gli animali parabiosed ricevono una combinazione di antibiotici e monitorare regola.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno interessi finanziari concorrenti.
Ringraziamenti
Gli autori desiderano ringraziare Adriane Mosley e Libuse Jerabek (Stanford) per l'assistenza con la tecnica chirurgica.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Isoflurano-Phoenix | Clipper | NDC 57319-559-06 | |
| di induzione Posi-Seal | Prodotti per imaging molecolare | AS-01-0530-SM | |
| Sistema di anestesia portatile | Prodotti per imaging molecolare | AS-01-0007 | |
| Pompa Gaymer T | Gaymar Industries, Inc | TP650 | |
| Coperta riscaldante (termoforo) | Kent Scientific Corp | TP-22G | |
| Pinze curve | Roboz | RS-5101 | |
| Forbici | Fine Science Tools (FST) | FST 14063-09 | |
| Porta aghi | FST | FST 12501-13 | |
| Rasoio elettrico | Oster | Golden A5 |
Riferimenti
- Bert, P. Expériences et considérations sur la greffe animale. Journal de l'Anatomie et de la Physiologie. 1, 69-87 Forthcoming.
- Bunster, E., Meyer, R. K. Improved methods of parabiosis. Anat. Rec. 57, 339-380 (1933).
- Waskow, C.
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Ristampe e permessi
