Biocompatibili pH reattivo nanosensori sol-gel possono essere incorporati in poli (acido lattico-co-glicolico) (PLGA) ponteggi elettrofilate. Le impalcature self-reporting prodotti possono essere utilizzati per il monitoraggio in situ delle condizioni microambientali mentre coltura di cellule sul patibolo. Questo è vantaggioso in quanto il costrutto cellulare 3D può essere monitorato in tempo reale senza disturbare l'esperimento.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Ponteggi self-reporting per coltura cellulare 3-Dimensional
In questo articolo
Sommario
Abstract
Celle di coltura in 3D su ponteggi adeguati è pensato per imitare al meglio il microambiente in vivo e aumentare le interazioni cellula-cellula. La risultante costrutto cellulare 3D può essere spesso più rilevante per studiare gli eventi molecolari e le interazioni cellula-cellula di esperimenti simili studiati in 2D. Per creare culture efficaci 3D con la vitalità delle cellule elevata in tutto il patibolo le condizioni di coltura come ossigeno e pH bisogno di essere attentamente controllata come gradienti di concentrazione di analiti possono esistere in tutto il costrutto 3D. Qui si descrivono i metodi di preparazione biocompatibili pH reattivo nanosensori sol-gel e la loro incorporazione in poli (acido lattico-co-glicolico) (PLGA) ponteggi elettrofilate insieme a loro successiva preparazione per la coltura di cellule di mammifero. I ponteggi reattivo pH possono essere utilizzati come strumenti per determinare microambientali pH all'interno di un costrutto cellulare 3D. Inoltre, tendiamo particolare la consegna di pH nanose reattivansors per l'ambiente intracellulare di cellule di mammifero la cui crescita è stata sostenuta da elettrofilate scaffold PLGA. La posizione citoplasmatica dei nanosensori reattive pH può essere utilizzato per monitorare pH intracellulare (PHI) durante la sperimentazione in corso.
Introduzione
Una strategia chiave nell'ingegneria dei tessuti è l'uso di materiali biocompatibili per fabbricare scaffold cui morfologia assomiglia al tessuto che sta per sostituire ed è anche in grado di sostenere la crescita e la funzione delle cellule 1,2. L'impalcatura fornisce supporto meccanico consentendo attaccamento cellulare e la proliferazione tuttavia permette la migrazione cellulare durante gli interstizi di un costrutto cellulare 3D. Il ponteggio deve permettere il trasporto di massa di nutrienti cellulari e non inibire la rimozione dei rifiuti metabolici 3.
Electrospinning è emerso come un metodo promet....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
Panoramica
Sezione 1 descrive la preparazione di pH nanosensori reattivo e la caratterizzazione della risposta nanosensori a pH utilizzando la spettrometria di fluorescenza e la loro dimensione al SEM.
Sezione 2 descrive la preparazione di elettrofilate scaffold polimerici e caratterizzazione della loro morfologia e dimensioni utilizzando SEM. Sezione 2 descrive anche la preparazione di scaffolds self-reporting, che sono ponteggi elettrofilate con l'inclusione dei nanosensori reattive pH. I risultanti ponteggi self-report sono caratterizzati da SEM per valutare se si è verificato eventuali modifiche morfologi....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
La distribuzione dimensionale delle pH nanosensori reattivi preparati è stata caratterizzata mediante SEM, dove la popolazione di nanosensori impressionate stati misurati e risultano avere dimensioni nanometriche nell'intervallo 240-470 nm (Figura 1A). Il raggiungimento di un diametro ridotto e ragionevolmente piccolo è coerente con l'utilizzo del metodo Stöber per preparare nanoparticelle. È stato trovato che utilizzando un ambiente basico pH durante la sintesi di nanoparticelle IE nan.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
L'ingegneria tissutale aspira a creare sostituti biologici che può essere utilizzato sia come in vivo come modelli in vitro e in tessuto in terapia sostitutiva tessuto di riparare, sostituire, mantenere o migliorare la funzione di un particolare tessuto o organo. Sostituti sintetici sono stati utilizzati per molti anni a sostituire o riparare ausilio di tessuti, ma questi spesso falliscono a causa della scarsa integrazione con il tessuto ospite e / o infezione, che alla fine porta al rifiu.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari in competizione.
Ringraziamenti
I finanziamenti del BBSRC è gentilmente riconosciuto (codice di autorizzazione BB H011293 / 1).
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Etanolo | Fisher | 32221 | |
| Dimetilformammide anidra (DMF) | Sigma | 270547 | |
| Idrossido di ammonio 50% (v/v) soluzione acquosa | Alfa Aesar | 35574 | diluito al 30% (v/v) con acqua pura |
| TEOS | Sigma | 13190-3 | |
| 3-Amminopropiltrietossisilano (APTES) | Sigma | A3648 | |
| 5-(e-6)-carbossifluoresceina, estere succinimidilico (FAM-SE) | Invitrogen | C1311 | |
| 6-carbossitetrametilrodamina, estere succinimidilico (TAMRA-SE) | Invitrogen | C1171 | |
| Fosfato di sodio monobasico (0,2 M) | Sigma Aldrich | S-9638 | |
| Fosfato di sodio bibasico (0,2 M) | Sigma Aldrich | S-0876 | |
| NaOH | Sigma Aldrich | S8045 | |
| Tripsina/EDTA | Sigma Aldrich | T4174 | |
| Penicillina/Streptomicina | Sigma Aldrich | P0781 | |
| PBS | Sigma Aldrich | D8537 | |
| DMEM | Sigma Aldrich | D6046 | |
| FBS | Fonte Bioscience | Batch-213-101992 | |
| L-Glutammina | Sigma Aldrich | G7513 | |
| Lipofectamine 2000 | Invitrogen | 11668-019 | |
| Optimem | Invitrogen | 11058-021 | |
| LysoTracker Rosso | Invitrogen | L-7528 | |
| Draq5 | Biostatus Ltd | DR50050 | |
| Azoto gassoso | BOC | ||
| DCM | Sigma Aldrich | 320269 | |
| TFA | Sigma Aldrich | T6508 | |
| Microscopio confocale | Leica TCS-SP | dotato di laser ad argon e kriptone e lente ad immersione in acqua 63X 0.9NA | |
| Luce UV | UVLS28 UVP, USA | ||
| Piastra di agitazione | SB161-3 Misuratore di pH Jencons-PLS | ||
| Jenway modello 3510 | |||
| Evaporatore rotante | Buchi Rotary Evaporatore R200 | ||
| Centrifuga (nanosensori) | Hermle Z300 | ||
| Centrifuga (coltura cellulare) | Thermo Scientific Heraeus Biofuge Primo | ||
| Vortex | Whirlimixer Fisherbrand | ||
| Ultrasuonatore | FB11021 Fisherbrand | ||
| Foglio di alluminio | Nottingham University | ||
| Piastra per colture cellulari da 35 mm | Siringa | 3000035 da 10 | |
| ml Siringa | Becton Dickenson | ||
| 3T3 Fibroblasti | Collezione europea di colture | ||
| PLGA | Lakeshore Biomaterials | 7525 DLG 7E | |
| Formiato di piridinio | Sigma Aldrich | P8535 | |
| Trypan blue | Sigma Aldrich | T8154 | |
| Sodio fosfato monobasico | Sigma Aldrich | S9638 | |
| Sodio fosfato bibasico | Sigma Aldrich | S5136 | |
| HCl | Sigma Aldrich | 320331 |
Riferimenti
- Takimoto, Y., Dixit, V., Arthur, M., Gitnick, G. De novo liver tissue formation in rats using a novel collagen-polypropylene scaffold. Cell Transplantation. 12 (4), 413-421 (2003).
- Sales, V. L., Engelmayr, G. C., et al.
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
Esplora altri articoli
