La gravidanza porta a cambiamenti significativi alla composizione in acidi grassi dei tessuti materni. Profili lipidici possono essere ottenuti tramite gascromatografia per consentire l'identificazione e la quantificazione degli acidi grassi nelle singole classi di lipidi tra i ratti alimentati con varie diete ad alto e basso contenuto di grassi durante la gravidanza.
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Articolo metodologico
L'uso di gas cromatografia per analizzare compositivo Variazioni degli acidi grassi nel fegato di ratto tessuto durante la gravidanza
In questo articolo
Sommario
Abstract
Gas cromatografia (GC) è un metodo altamente sensibile utilizzato per identificare e quantificare il contenuto di acidi grassi dei lipidi dai tessuti, cellule e plasma / siero, ottenendo risultati con elevata precisione e alta riproducibilità. Negli studi metabolici e della nutrizione GC permette la valutazione delle variazioni nelle concentrazioni di acidi grassi seguenti interventi o durante cambiamenti di stato fisiologico come la gravidanza. Estrazione in fase solida (SPE) utilizzando amminopropil cartucce di silice permette la separazione delle principali classi di lipidi, tra cui trigliceridi, diversi fosfolipidi e esteri del colesterolo (CE). GC combinato con SPE è stato utilizzato per analizzare i cambiamenti nella composizione in acidi grassi della frazione CE nel fegato dei ratti vergini e gravide che erano stati alimentati con varie diete ad alto e basso contenuto di grassi. Ci sono significativi effetti di interazione di dieta / gravidanza al momento il contenuto di acido omega-3 e omega-6 acidi grassi del fegato CE, che indica che le donne incinte hanno una risposta diversa a manipulat alimentareione che si vede tra le femmine vergini.
Introduzione
Gas cromatografia (GC) è una tecnica ben consolidata utilizzato per identificare e quantificare l'incorporazione degli acidi grassi in pool di lipidi e le membrane cellulari 1,2 durante la supplementazione o fisiologiche condizioni come l'obesità (e le malattie correlate come il diabete) o la gravidanza 3 - 5. E 'adatto per analizzare i tipi e le quantità di grassi negli alimenti anche. Questo è utile quando caratterizzare diete sperimentali, nonché di assicurare che l'industria alimentare è conforme alle normative. Ad esempio, GC può essere utilizzata per confermare l'identità e la quantità di acidi grassi di un prodotto com....
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Protocollo
1. Procedure di animali
- Tutti i lavori degli animali deve essere effettuata in conformità con le Home Office Animals (Scientific Procedures) Act (1986).
- Mate ratti Wistar di età compresa tra 10 settimane da allevamento monogama, e confermare la gravidanza dalla comparsa di un tappo vaginale. Registrare questo come il giorno 1 di gestazione, e di iniziare la dieta sperimentale. Per le femmine vergini, ospitare ogni ratto individualmente, e iniziare la dieta sperimentale.
- Dopo l'alimentazione diete sperimentali per 20 giorni euthanize ratti di CO 2 asfissia seguita da dislocazione cervicale.
- Utilizzare pinze e for....
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Risultati
Il successo di questo metodo dipende seguendo il protocollo preciso e sull'utilizzo di solventi puliti e reagenti per ridurre 'rumore' e contaminazione che può apparire su un cromatogramma. Campioni contaminati sono più difficili da analizzare, abbassando la precisione dell'area sotto i calcoli della curva. Se il protocollo è seguito con successo un cromatogramma con chiare simmetriche, picchi ben definiti e con il minimo rumore di fondo dovrebbe essere ottenuto come illustrato nella Figura 3.
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Discussione
Gascromatografia è una tecnica accurata da utilizzare per l'analisi degli acidi grassi, e la sua elevata riproducibilità ritenga tecnica adatta per analisi cliniche. Colonne GC appropriate devono essere utilizzati per consentire l'identificazione di acidi grassi di interesse, con colonne disponibili avere variazioni nella polarità della fase stazionaria, lunghezza della colonna e il diametro interno. L'uso di una colonna capillare di silice fusa in questo metodo di analisi fornisce una buona stabilità termic.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano interessi finanziari concorrenti.
Ringraziamenti
Gli autori vorrebbero riconoscere il contributo di Meritxell Romeu-Nadal allo studio sui ratti.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Metanolo | Fisher Scientific | M/4056/17 | Fumi 'CAUTION' - |
| Cloroformio | Fisher Scientific | C/4966/17 | Fumi 'CAUTION' - HPLC Grado |
| BHT | Sigma- Aldrich | W218405'CAUTION' Fumi di polvere - | |
| Anidro NaCl | Sigma- Aldrich | S9888 | |
| Anidro Esano | Fisher Scientific | H/0406/17'CAUTION | ' Fumi - Grado HPLC |
| Acido acetico glaciale | Sigma- Aldrich | 695084'CAUTION' Ustioni - 99,85% | |
| Acido solforico | Sigma- Aldrich | 339741'CAUTION' Ustioni - 99,999% | |
| Carbonato di potassio | Sigma- Aldrich | 209619 | 99% ACS Grado reagente |
| Bicarbonato di potassio | Sigma- Aldrich | 237205 | 99,7% ACS Acetato |
| di etile | Fisher Scientific | 10204340 | Fumi "CAUTION" - 99+% GLC SpeciFied |
| Toluene | Fisher Scientific | T/2300/15 | Fumi 'CAUTION' Etere |
| dietilico | Sigma- Aldrich | 309966'CAUTION' Fumi | |
| Bombola di azoto (senza ossigeno) | BOC | 44-w | 'ATTENZIONE' Gas compresso - rischio di esplosione |
| Cartucce SPE in silice aminopropilica | Cartuccia Agilent | 12102014 | - Massa della perlina 100 mg |
| Gel di silice Cartucce SPE | Cartuccia 14102010 Agilent | - Massa della perlina 100 mg | |
| Capsule molecolari | Sigma-Aldrich | 334324 | Pellets, AW-300, 1,6 mm |
| Pipette in vetro Pasteur | Fisher Scientific | FB50251 |
Riferimenti
- Browning, L. M., et al. Incorporation of eicosapentaenoic and docosahexaenoic acids into lipid pools when given as supplements providing doses equivalent to typical intakes of oily fish. Am. J. Clin. Nutr. 96 (4), 748-758 (2012).
- Cao, J., Schwichtenberg, K. A., Hanson, N. Q., Tsai, M. Y.
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Ristampe e permessi
