Iniezione percutanea intramiocardico ecocardiografia-guida rappresenta una modalità efficiente, affidabile, e il targeting per la fornitura di agenti di trasferimento di geni o cellule nel cuore murino. Seguendo la procedura descritta in questo protocollo, l'operatore può rapidamente diventare competente in questa versatile tecnica, mini-invasiva.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Ultrasound-guided transtoracica intramiocardico iniezione nei topi
In questo articolo
Sommario
Abstract
Modelli murini di malattie cardiovascolari sono importanti per lo studio dei meccanismi fisiopatologici e di esplorare potenziali terapie rigenerative. Gli esperimenti che coinvolgono l'iniezione infarto sono attualmente svolte da accesso chirurgico diretto attraverso una toracotomia. Mentre conveniente quando eseguita al momento di un'altra manipolazione sperimentale come legatura dell'arteria coronaria, la necessità di una procedura invasiva consegna intramiocardico limita potenziali disegni sperimentali. Con la sempre migliore risoluzione ultrasuoni e modalità di imaging non invasive avanzate, è ora fattibile per eseguire di routine, iniezione intramiocardico percutanea ecoguidata. Questa modalità efficiente e affidabile fornisce agenti ad una zona mirata di miocardio. I vantaggi di questa tecnica includono la prevenzione di morbilità chirurgica, la possibilità di indirizzare le regioni del miocardio selettivo sotto guida ecografica, e la possibilità di esprimere iniettato al myocardium in più intervalli di tempo predeterminati. Con la tecnica praticata, complicanze da iniezione intramiocardico sono rari, e topi tornare rapidamente alla normale attività sul recupero da anestetico. Seguendo la procedura descritta in questo protocollo, l'operatore con esperienza di base ecocardiografia può rapidamente diventare competente in questa versatile tecnica, mini-invasiva.
Introduzione
Le malattie cardiache sono la principale causa di morte per uomini e donne negli Stati Uniti, che rappresentano 600.000 decessi ogni anno 1. Modelli murini di malattie cardiovascolari sono di fondamentale importanza per lo studio dei meccanismi fisiopatologici e per esplorare potenziali terapie. Consegna miocardico di vettori di terapia genica, cellule staminali, RNA modificati, e altri agenti terapeutici permessi indagine del loro potenziale terapeutico per le malattie cardiache 2-7. Attualmente, ci sono opzioni limitate per la consegna del miocardio di agenti terapeutici in modelli murini 6. Iniezione intramiocardico sotto visualizz....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
Tutte le operazioni descritte sono state eseguite secondo protocolli approvati dalla cura e l'uso di animali Comitato Istituzionale di Hospital di Boston per bambini.
1 Preparazione
- Eseguire basale cardiaca valutazione anatomica e funzionale da ecocardiografia prima di iniziare la procedura di iniezione, come il trasduttore di posizione fissa ottimale per l'iniezione intramiocardico non può cedere le viste standard ottimali per delineare l'anatomia e la valutazione della funzione.
- La messa a punto di iniezione è mostrata nelle figure 1A-1C. Inserire una siringa vuota con un ago inguainato,....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
Murino iniezione intramiocardico di blu tipo e microsfere fluorescenti
Iniezione di colorante blu di Evan è utile per scopi di formazione. Subito dopo l'iniezione, eutanasia il mouse e rimuovere il cuore per visualizzare la posizione del colorante blu iniettato. Figura 5 mostra un esempio di una iniezione di successo, con colorante blu infiltrante il miocardio a livello muscolare metà papillari (Figura 5A, regione racchiusa dalla linea tratteggiata). Evans .......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
Biologics possono essere consegnati al miocardio mediante iniezione diretta intramiocardico, iniezione intrapericardica, o l'amministrazione indiretta attraverso il flusso sanguigno. Cellulari basato recenti sperimentazioni di terapia in modelli con infarto miocardico hanno descritto un approccio toracotomia aperta per la fornitura di iniettato 12-14. Un fattore importante per il successo di un intervento terapeutico infarto dipende dalla scelta del percorso di consegna. La dose massima locale del biologi.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
TWP è stato finanziato dalla Irish Cardiac Society Brian McGovern Travelling Fellowship. WTP è stato finanziato da R01 HL095712 e da un AHA Established Investigator Award.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Sistema di imaging a ultrasuoni Vevo 2100 | Trasduttore Visualsonics | ||
| Vevo Integrated Rail System III | Trasduttore Visualsonics | ||
| Microscan MS400 | Trasduttore Visualsonics | ||
| Microscan MS550D | Aghi Visualsonics | ||
| PrecisionGlide | BD | 305128 | 30 G x 1 in/2,5 cm |
| 1 cc siringa con punta scorrevole | Exel International | 26048 | o equivalente |
| A tenuta di gas 50 μ l. siringhe di vetro | Hamilton | 1705 | |
| Trypan colorazione blu (0,4%) | Gibco | 15250 | o equivalente |
| Isoflurane | Baxter | AHN3640 | o equivalente |
| Aquasonic 100 | Parker Laboratories | (01-08) | o |
| microsfere di polistirene equivalenti (rosso fluorescente) | Life Technologies | F-8842 | o equivalente |
Riferimenti
- Kochanek, K. D., et al. Deaths: final data for 2009. Natl Vital Stat Rep. 60 (3), 1-117 Forthcoming.
- Strauer, B. E., Steinhoff, G. 10 years of intracoronary and intramyocardial bone marrow stem cell therapy of the heart: fro....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
