Per migliorare la nostra conoscenza della formazione neotissue cellulare e molecolare, un modello murino della TEVG è stata sviluppata di recente. Gli innesti sono stati impiantati come infrarenali innesti vena cava interposizione di C57BL / 6 topi. Questo modello raggiunge risultati simili a quelli ottenuti nella nostra ricerca clinica, ma nel corso di un time-course di gran lunga ridotto.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
L'impianto di Vena cava inferiore Interposizione Graft in modello murino
In questo articolo
Sommario
Abstract
Scaffold biodegradabili seminati con cellule mononucleari del midollo osseo (BMC) sono spesso utilizzati per la chirurgia ricostruttiva per il trattamento di anomalie cardiache congenite. I risultati clinici a lungo termine hanno mostrato ottimi tassi di pervietà, tuttavia, con una significativa incidenza di stenosi. Per studiare i meccanismi cellulari e molecolari della formazione neotissue vascolare e prevenire lo sviluppo di stenosi in ingegneria tessutale innesti vascolari (TEVGs), abbiamo sviluppato un modello murino dell'innesto con circa 1 mm di diametro interno. In primo luogo, le TEVGs stati assemblati da impalcature tubolari biodegradabili fabbricate da un tessuto non tessuto di acido poliglicolico feltro maglia rivestito con ε-caprolattone e L-lattide copolimero. I ponteggi sono stati poi collocati in un liofilizzatore, aspirati per 24 ore, e conservati in un essiccatore fino semina delle cellule. In secondo luogo, midollo osseo è stato prelevato da topi donatori e cellule mononucleari sono stati isolati da centrifugazione in gradiente di densità. Terzo, circa un milione di cellule eranoseminate su un ponteggio e incubati O / N. Infine, i ponteggi seminati stati impiantati come infrarenali innesti vena cava interposizione di C57BL / 6 topi. Gli innesti impiantati dimostrato eccellente pervietà (> 90%), senza evidenza di complicanze tromboemboliche o di formazione aneurismatica. Questo modello murino ci aiuterà a comprendere e quantificare i meccanismi cellulari e molecolari della formazione neotissue nel TEVG.
Introduzione
Difetti cardiaci congeniti sono condizioni gravi che colpiscono circa l'8% dei nati vivi negli Stati Uniti. Circa il 25% di questi neonati con difetti cardiaci congeniti o 2,4 per 1.000 nati vivi, richiedono un trattamento invasivo nel primo anno della loro vita 1. Il trattamento più efficace per la malattia cardiaca congenita è la chirurgia ricostruttiva. Purtroppo, complicazioni derivanti dall'uso di condotti vascolari attualmente disponibili sono la causa più importante di morbilità e mortalità postoperatoria.
Per risolvere questo problema, abbiamo sviluppato i primi di ingegneria tessutale innesti vascolari (TEVGs) ....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
NOTA: Tutte le procedure sugli animali sono state approvate dalla Hospital Institutional Animal Care ed uso Comitato dei Bambini di Nationwide.
1. Graft Manufacturing
- Rendere la soluzione ε-caprolattone e L-lattide copolimero P (LA / CL) aggiungendo 100mg P (LA / CL) in 2 ml di diossano sotto una cappa aspirante. Mettere la soluzione in un vortice e mescolare continuamente per 1-1,5 ore per sciogliere completamente.
- Nel frattempo, rimuovere un foglio di acido poliglicolico (PGA) feltro dal congelatore e tagliare diverse sezioni 5 x 8 mm. Anche tagliare la punta di una pipetta microlitri 0,1-10 appena sopra il filtro. ....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
Uno schema di TEVG impianto è mostrato in Figura 1. Midollo osseo è stato raccolto da un topo donatore e mono cellule nucleari sono stati isolati mediante centrifugazione densità e quindi seminate su uno scaffold biodegradabile. Gli scaffold seminati sono stati incubati O / N e impiantati a un mouse destinatario come la vena cava inferiore interposizione innesto.
La Figura 2 illustra la microscopia elettronica a scansione del ponteggio PGA-P (CL / LA). Il di.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
Il modello murino di TEVG è uno strumento prezioso per studiare i meccanismi cellulari e molecolari della formazione neotissue e lo sviluppo di stenosi. La testa di serie BM-MNC stato mostrato in entrambe le immagini istologiche e SEM delle cellule inseminate sulla marza 11. Efficienza semina delle cellule è stata anche dimostrata utilizzando un test DNA 7. Usando questo sistema modello abbiamo dimostrato che semina delle cellule riduce l'incidenza dello sviluppo di TEVG stenosi, che era la pri.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto, in parte, da una sovvenzione del NIH (RO1 HL098228) per CKB.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Feltro di acido poliglicolico (PGA) | Strutture | Custome ordinato | |
| Punta di pipetta, 0,1-10 μ l | Fisher Sientific | 02-707-456 | |
| Liofilizzatore | Labconco | 7070020 | |
| RPMI medium 1604 | Gibco | 11875-093 | |
| Piastra di Petri | BD | 353003 | |
| piastra a 24 pozzetti | Corning | 3526 | |
| tubo da 15 cc | BD | 352096 | |
| Ficoll | Sigma | 10831-100ml | Chiamato anche 'Histopaque'DPBS |
| Gibco | 14190-144 | ||
| Tagliaossa Littauer 4.5" Dritto | Roboz | RS-8480 | Per |
| BM raccolta Pinze 4.5" | Roboz | RS-8120 | Per |
| BM raccolta Forbici 4.5" | Roboz | RS-5912 | Per la raccolta di BM |
| Microscopio | Leica | M80 | |
| C57BL / 6J (H-2b), Female | Jackson Laboratories | 664 | 8-12 settimane |
| Iniezione di ketamina cloridrato | Hospira Inc. | NDC 0409-2053 | |
| Soluzione sterile di xilazina | Akorn Inc. | NADA# 139-236 | |
| Ketoprofene | Fort Dodge Animal Health | NDC 0856-4396-01 | |
| Ibuprofene | PrecisionDose | NDC 68094-494-59 | |
| Eparina sodica | Sagent Pharmaceticals | NDC 25021-400 | |
| Soluzione salina (sterile 0,9% cloruro di sodio) | Hospira Inc. | NDC 0409-0138-22 | |
| Iniezione di cloruro di sodio allo 0,9% | Hospira Inc. | NDC 0409-4888-10 | |
| Unguento oftalmico Petrolatum | Dechra Veterinary Products | NDC 17033-211-38 | |
| Cuscinetti per la preparazione dello iodio | Triad Disposables, Inc. | NDC 50730-3201-1 | |
| Tamponi per la preparazione dell'alcol | McKesson Corp. | NDC 68599-5805-1 | |
| Applicatori con punta in cotone | Fisher Scientific | 23-400-118 | |
| Forbice fine | FST | 14028-10 | |
| Pinza micro-adson | FST | 11018-12 | |
| Pinza per applicazione morsetto | FST | 00072-14 | |
| S & T Morsetto vascolare | FST | 00396-01 | |
| Forbici a molla | FST | 15008-08 | |
| Divaricatori Colibri | FST | 17000-04 | |
| Dumont #5 pinza | FST | 11251-20 | |
| Dumont #7 - pinza fine | FST | 11274-20 | |
| Dumont #5/45 pinza | FST | 11251-35 | |
| Porta aghi Tish / pinze | Micrins | MI1540 | |
| Sutura monofilamento di poliammide nero, 10-0 | AROSurgical Instruments Corporation | TI638402 | Per suturare l'innesto |
| Sutura monofilamento di poliammide nero, 6-0 | AROSurgical Instruments | SN-1956 | Per la muscolatura e la chiusura della pelle |
| Spugne non tessute | McKesson Corp. | 94442000 | |
| Emostatico assorbibile | Ethicon | 1961 | |
| Siringa da 1 ml | BD | 309659 | |
| Siringa da 3 ml | BD | 309657 | |
| Siringa da 10 ml | BD | 309604 | |
| 18 G 1,5 pollici, Ago | BD | 305190 | |
| 25 G 1 pollici, Ago | BD | 305125 | |
| 30 G 1 pollici, Ago | BD | 305106 | |
| Ricircolatore d'acqua calda | Gaymar | TP-700 | |
| Cuscinetto riscaldante | Gaymar | TP-22G | |
| Trimmer | Wahl | 9854-500 |
Riferimenti
- Heart Association, A. merican Heart Disease and Stroke Statistics—2012 Update. Circulation. 125, (2012).
- Shinoka, T., et al. Creation Of Viable Pulmonary Artery Autografts Through Tissue Engineering. The Journal of Thoracic and Cardiov....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
Esplora altri articoli
Innesto vascolare d'ingegneria tissutalecellule mononucleate del midollo osseocentrifugazione a gradiente di densitàimpianto nella vena cava inferiorefabbricazione di scaffold biodegradabiliprotocollo di semina cellularetecniche microchirurgicheanalisi istologicaformazione di neotessutoprevenzione della stenosi
