Campionamento e Isolamento di Nematodi entomopatogeni Suolo (Steinernematidae, Heterorhabditidae)

Sommario

Nematodi entomopatogeni sono nematodi del suolo abitare che parassitano una vasta gamma di insetti. Dimostriamo metodi di campionamento utilizzati per l'isolamento di questi nematodi dal terreno utilizzando due tecniche: l'adescamento insetto e la trappola bianco modificato, per il recupero dei nematodi dai campioni di suolo e cadaveri insetti infetti, rispettivamente.

Abstract

Nematodi entomopatogeni (aka EPN) rappresentano un gruppo di nematodi del suolo abitare che parassitano una vasta gamma di insetti. Questi nematodi appartengono a due famiglie: Steinernematidae e Heterorhabditidae. Fino ad oggi, più di 70 specie sono state descritte nel Steinernematidae e ci sono circa 20 specie in Heterorhabditidae. I nematodi hanno una collaborazione mutualistica con i batteri Enterobacteriaceae e insieme agiscono come un complesso potente insetticida che uccide una vasta gamma di specie di insetti.

Qui, ci concentriamo sulle tecniche più comuni considerati per la raccolta EPN dal suolo. La seconda parte di questa presentazione si concentra sulla tecnica insetti adescamento, un approccio ampiamente utilizzato per l'isolamento di EPN dai campioni di suolo, e la tecnica trappola bianco modificato che viene utilizzato per il recupero di questi nematodi da insetti infetti. Questi metodi e le tecniche sono passaggi fondamentali per la creazione di successo di culto EPNUres in laboratorio e anche la base per altri testi biologici che considerano questi nematodi come organismi modello per la ricerca in altre discipline biologiche. Le tecniche mostrate in questa presentazione corrispondono a quelle eseguite e / o creazione di membri della SP Archivio laboratorio così come quelli descritti da vari autori.

Introduzione

Molti nematodi sono associati con gli insetti, e le loro interazioni ospite variano da vantaggioso per dannosa. Qui, ci concentriamo su un gruppo di nematodi che sono patogeni di insetti, noto anche come nematodi entomopatogeni (o EPN). Due famiglie di nematodi appartengono a questo gruppo di nematodi: Steinernematidae e Heterorhabditidae ^11,13. Il loro effetto patogeno è infatti conferita dalla loro interazione con anaerobi facoltativi batteri enterici (batteri Xenorhabdus associano con steinernematids e batteri Photorhabdus associare a heterorhabditids) ^2. I batteri sono vectored da un host ad un altro insetto da parte l'....

Protocollo

1. Soil Sample Collection

1. Si consideri che copre una superficie minima di 2-4 m ² per ogni sito di campionamento.
2. Raccogliere campioni di terreno a una profondità di almeno 15 cm (Figura 4).
3. Prendere almeno 5 campioni casuali all'interno di questa area.
4. Prendere 3 sottocampioni per campione. Seconda dell'obiettivo dello studio, sia combinare sottocampioni o mantenerli separati.
5. Collocare ogni campione in un sacchetto di plastica. Considerare doppio insaccamento per evitare perdite di campioni (Figura 4).
6. Campioni etichetta con un pennarello indelebile. In....

Risultati

Soil Sample Collection

Terza fase larve infettive di EPN sono le uniche fasi di vita liberi nel ciclo di vita di questi nematodi ', che risiedono nel terreno (Figura 1). Pertanto, la raccolta di campioni di suolo è un metodo molto efficace per il recupero di questi nematodi. Figura 4 mostra un profilo del terreno che indica la profondità alla quale devono essere prelevati campioni. Preservare l'umidità di un campione è un fattore chiave per la sopravvivenza .......

Discussione

Questa manifestazione è la prima delle due presentazioni che descrivono una serie di tecniche che sono comunemente usati per lo studio EPN e dei loro batteri simbionti. Queste tecniche rappresentano passaggi fondamentali per la creazione di successo delle culture EPN in laboratorio e costituiscono anche la base per altri biotest che impiegano EPN come organismi modello per la ricerca.

Vari sondaggi del terreno di EPN hanno dimostrato che la loro abbondanza e la distribuzione può variare tra .......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Galleria mellonella	Timberline	http://www.timberlinefisheries.com/ProductDetails.asp?ProductCode=WAXLG	Per la tecnica di adescamento degli insetti
Carta da filtro, 55 mm Cellulosa di grado 1	Whatman/VWR	28450-048	Camera di infezione e gruppo trappola bianca
60 x 15 mm Piastre di Petri	VWR	25384-092	Camera di infezione e gruppo trappola bianca
Piastre di Petri 100 x 15 mm	VWR	25384-088	Camera di infezione e trappola bianca
Sacchetti di plastica ZIPloc	Ace Hardware o negozio		Campionamento del terreno
Pipettatore meccanico P1000, P200 ml	VWR	89130-562; 89130-566	Camera di infezione e gruppo trappola bianca
Punte Pippetor 1000ml, 200 ml	VWR	16466-004 ; 53510	Camera di infezione e assemblaggio trappola bianca
Candeggina	Ace Hardware o negozio di ferramenta		Campionamento del suolo, disinfezione
Ipoclorito di sodio	Ace Hardware o negozio		Campionamento del suolo, disinfezione
70% Ethyl alochol	AAPER	17212945	Campionamento del suolo, disinfezione
Pale	Ace Hardware o negozio di ferramenta locale	N/A	Campionamento del suolo
Campionatore tubolare del suolo	Accuproducts		Campionamento del suolo
Sonda del suolo, manico lungo	Nupla	PRB4T 69401 Classico	Campionamento del suolo
Nastro di misurazione	Ace Hardware o negozio		Campionamento del suolo
Nastro per segnalazioni, vari colori	Ace Hardware o negozio di ferramenta		Campionamento del suolo
Fiasche per coltura tissutale	VWR	Falcon, 29185-304	White trap, raccolta di EPN
Flaconi di lavaggio, polietilene, bocca larga	VWR	16650-107	Sifone bianca, raccolta di EPN

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