Qui, presentiamo un protocollo per studiare l'immunologia del rigetto. Il modello chirurgico presentato riporta un breve tempo operatorio e una tecnica concisa. A seconda della combinazione di ceppo donatore-ricevente, il rene trapiantato può sviluppare rigetto cellulare acuto o danno cronico da allotrapianto, definito da fibrosi interstiziale e atrofia tubulare.
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Articolo metodologico
Mouse trapianto renale: Modelli di Allograft Rifiuto
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il rigetto del rene trapiantato nell'uomo è ancora una delle principali cause di morbilità e mortalità. Il modello murino di trapianto renale replica fedelmente sia i processi tecnici che patologici che si verificano nel trapianto renale umano. Sebbene esistano modelli murini di rigetto allogenico in organi diversi dal rene e siano tecnicamente più fattibili, ci sono prove che organi diversi suscitano modalità e dinamiche di rigetto disparate, ad esempio il decorso temporale del rigetto nell'allotrapianto cardiaco e renale differisce significativamente in alcune combinazioni di ceppi. Questo modello è uno strumento interessante per molte ragioni, nonostante le sue sfide tecniche. Poiché gli aplotipi del ceppo di topo consanguineo sono ben caratterizzati, è possibile scegliere combinazioni di donatore e ricevente per modellare il rigetto acuto dell'allotrapianto mediante trapianto in loci MHC di classe I e II. Al contrario, con il trapianto tra ceppi con aplotipi simili, può essere indotto un processo cronico in cui il rene allotrapianto sviluppa fibrosi interstiziale e atrofia tubulare. Abbiamo modificato la tecnica chirurgica per ridurre i tempi operatori e migliorare la facilità dell'intervento, tuttavia è ancora necessario superare una curva di apprendimento per replicare fedelmente il modello. Questo studio fornirà i punti chiave della procedura chirurgica e aiuterà il processo di creazione di questa tecnica.
Introduzione
Trapianto renale con successo per il trattamento di insufficienza renale è stata descritta per la prima nel 1955 tra gemelli monozigoti 1, da allora è diventato un rivoluzionario trattamento per i pazienti con insufficienza renale allo stadio terminale in tutto il mondo, che offre sia un miglioramento nella durata e la qualità della vita 2. Tuttavia la sopravvivenza del trapianto a lungo termine è stata ostacolata da una moltitudine di processi patologici con conseguente danno cronica del trapianto 3.
Rifiuto del rene trapiantato negli esseri umani rimane una delle principali cause di morbilità, nonostante....
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Protocollo
Adeguati etica istituzionali nazionali e locali dovrebbero essere a posto prima di eseguire esperimenti su animali. In particolare nel Regno Unito i seguenti esperimenti sono stati intrapresi sotto gli Animali (Scientific Procedures) Act 1986, in cui sono disponibili ad operare contemporaneamente due microsurgeons il chirurgo donatore deve eseguire i passaggi 1,1-1,16 poi da 3.1 a 3.5, mentre il chirurgo destinatario esegue 2.1 a 2.8 . Per un singolo operatore le fasi possono essere seguite in modo sequenziale.
1 donatore Preparazione
Nota: La procedura qui presentata è un donatore C57BL / 6 BM12 e de....
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Risultati
Renale rigetto del trapianto allogenico può essere valutata mediante analisi istologica di sezioni di tessuto incluse in paraffina methacarn-fisso del rene trapiantato (Figura 2). Trapianto di reni tra Isograft risultati topi singenici in renale danno da riperfusione ischemica, comunque da 4 settimane di tubuli hanno recuperato e sono istologicamente paragonabili a reni nativi. Rigetto acuto può essere modellato da C57BL / 6 trapianto renale in riceventi BALB / c, entro 1 settimana non vi è diffusa infi.......
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Discussione
Il modo più ben descritto effettuare l'anastomosi arteriosa è utilizzare l'aorta distale del donatore, con l'arteria renale in continuazione, in modo end-to-side all'aorta destinatario. Descriviamo l'uso di una patch aortica, simile al mirroring 'Carrell cerotto' che ha effettuato nel trapianto di rene umano che riteniamo essere più conveniente. Anche se segnalazioni in letteratura di tempo donatore e ricevente operativa sono scarsi crediamo che utilizzando una patch aortico al destinatario a.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Finanziamento da Rene Research UK, The Royal College of Surgeons di Edimburgo e la Società Europea di Trapianto sostenuto questo studio.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Strumenti chirurgici Forbici | |||
| dissezione smussate | Strumenti per la scienza fine | 14072-10 | Per il taglio della pelle |
| Forbici curve Castoviejo | Strumenti per la scienza fine | 15017-10 | Per il taglio dei tessuti |
| Forbici a molla - dritte | Strumenti per la scienza | 15000-08 | Per il taglio della sutura |
| Pinze dentate 1x2 denti | Strumenti per le scienze | 11021-12 | |
| 2 pinze a punta fine (Dumont No.5) | Strumenti per le scienze fini | 11251-20 | |
| Pinze angolate a punta fine (Dumont n. 5/45) | Strumenti per le scienze | 11253-25 | Per la dissezione smussata |
| Pinze a punta fine curva (Dumont n. 7) | Strumenti per le scienze | 11273-22 | Utile per passare intorno ai vasi |
| Crile Haemostat curvo | Strumenti per le scienze | 1300-04 | |
| Applicatore di micro clip con blocco | Strumenti per le scienze | 18056-14 | |
| 2 x Micro serrefines larghezza molla 2 mm, lunghezza ganascia 4 mm | Fine Science Tools | 18055-04 | Morsetti microvascolari |
| 2 x Divaricatore a filo Colibri da 3 cm | Fine Science Tools | 17000-03 | |
| Porta aghi Castroviejo con blocco | Fine Science Tools | 120660-01 | |
| Applicatore di clip per ferite | Fine Science Tools | 12031-07 | |
| Clip per ferite da 7 mm | Fine Science Strumenti | 12032-07 | Rimuovere da 7 a 10 giorni dopo l'intervento |
| Attrezzatura | |||
| Microscopio OPMI pico | Carl Zeiss | S100 | |
| Unità di cauterizzazione termica con punta fine | Geiger | 150A | |
| Pad elettronico termico | Cozee Cumfort | n/a | |
| Euroklav 23-S | Melag | n/a | Autoclave |
| Monouso attrezzatura | |||
| 7/O Sutura intrecciata in seta | Pearsall | 30514 | |
| 10/O Sutura Dafilon (poliammide) | B-Braun | ||
| 6/O Vicryl (plygalectin) | Ethicon | W9537 | |
| Ago smussato regolare, 1 pollice, 21G | Bection, Dickinson and Company | 305175 | Per anastamosi ureterale |
| Ago smussato regolare, 5/8 pollici, 25G | Bection, Dickinson and Company | 305122 | |
| Ago smussato regolare, 1/2 pollice, 30G | Bection, Dickinson and Company | 304000 | |
| Ago da insulina 1ml, 29G | Bection, Dickinson and Company | 324827 | |
| Ago da insulina 0,3ml, 30G | Bection, Dickinson and Company | 324826 | |
| 1 ml con punta a slitta | Bection, Dickinson and Company | 300184 | |
| siringa da 5 ml con punta a slitta | Bection, Dickinson and Company | 302187 | |
| Tamponi di carta Wypall | Kimberley-Clark | L40 | sterilizzato in autoclave |
| Cotton fioc | Johnson and Johnson | n/a | sterilizzato in autoclave |
| Teli lisci | Guardian | CB03 | sterilizzato in autoclave |
| Piatto di coltura cellulare 60 mm x 15 mm | Corning Incorporated | 430166 | |
| Spillo di erogazione | B-Braun | DP3500L / 413501 | Utilizzato con NaCl 0,9% |
| Reagenti e farmaci | |||
| (Lacri-Lube) Paraffina morbida bianca 57,3%, olio minerale 42,5% e alcoli di lanolina 0,2% | Allergan Ltd | 21956GB10X | |
| (Videne) Povidone-iodio 10% | Ecolab Ltd | PL 04509/0041 | |
| (Vetalar V) Ketamina cloridrato | Pfizer Animal Health | Vm 42058/4165 | 100mg/ml soluzione (dose 200mg/kg) |
| (Domitor) Medetomidina cloridrato | Orion Pharma | Vm 06043/4003 | 1mg/ml (dose 0,5mg/kg) |
| (Vetergesic) Bupernorfina cloridrato | Alsto Animal Health | Vm 00063/4002 | 0,3 mg/ml (dose 0,05 mg/kg) |
| (Antisedan) Atipamezolo idrocoruro | Orion Pharma | Vm 06043/4004 | 5 mg/ml (dose 2 mg/kg) |
| Soluzione dell'Università del Wisconsin | Belzer Bridge to Life | n/a | dose circa 500 microlitri/topo |
| NaCl 0,9% | Baxter | FKE1323 | |
| Eparina solfato | non proprietario | n/a | 5000 unità/ml (dose 5 unità/mouse) |
Riferimenti
- Guild, W. R., Harrison, J. H., Merrill, J. P., Murray, J. Successful homotransplantation of the kidney in an identical twin. Trans. Am. Clin. Climatol Assoc. 67, 167-173 (1955).
- Wolfe, R. A., et al.
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Ristampe e permessi
