La membrana corioallantoidea del pulcino (CAM) è immunodeficiente e altamente vascolarizzata, il che la rende un modello naturale in vivo di crescita tumorale e angiogenesi. In questo protocollo, descriviamo un metodo affidabile per la crescita di tumori di carcinoma epatocellulare (HCC) tridimensionali e vascolarizzati utilizzando il test CAM.
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In questo articolo
Sommario
Abstract
La membrana corioallantoidea pulcino (CAM) comincia a sviluppare il giorno 7 dopo la fecondazione e matura di giorno 12. Il CAM è naturalmente immunodeficienti e altamente vascolarizzato, che lo rendono un sistema ideale per tumore impianto. Inoltre, il CAM contiene proteine della matrice extracellulare, come fibronectina, laminina, collagene, integrina alfa (v) beta3, e MMP-2, che lo rendono un modello attraente per studiare invasione tumorale e metastasi. Gli scienziati hanno a lungo approfittato della fisiologia del CAM usandolo come modello di angiogenesi. Più di recente, il test CAM è stato modificato per lavorare come in vivo xenotrapianto sistema modello per vari tipi di cancro che colma il divario tra il lavoro di base in vitro e modelli di cancro animali più complessi. Il test permette CAM per lo studio della crescita tumorale, terapie anti-tumorali, e percorsi molecolari pro-tumorali in un sistema biologicamente rilevante che è sia in termini di costi e di tempo efficace. Qui, descriviamo lo sviluppo di Xen CAMModello ograft del carcinoma epatocellulare (HCC), con tassi di sopravvivenza embrionali fino al 93% e tumore affidabile take che porta alla crescita dei tumori vascolarizzati tridimensionali.
Introduzione
Il carcinoma epatocellulare (HCC) è la 3 ° causa principale di mortalità per cancro nel mondo 1. Attualmente solo il 30% dei pazienti con carcinoma epatico sono ammissibili per i trattamenti chirurgici potenzialmente curative 2, e la chemioterapia sistemica non è efficace 3. Pertanto, vi è una pressante necessità clinica insoddisfatta di terapie HCC romanzo, e lo sviluppo di sistemi modello adatti efficiente sperimentazione di nuovi agenti. Il corioallantoidea test pulcino membrana (CAM) fornisce una riproducibilità, costo-efficacia, e veloce metodo di medio-throughput di testare potenziali farmaci antitumorali in vivo.....
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Protocollo
Incubazione 1. Egg
- Ottenere 8 giorni vecchi specifici uova embrionate esenti da organismi patogeni.
- Mettere le uova in rotazione vassoio dell'uovo, estremità stampati rivolti verso l'alto, e posizionare il vassoio rotante all'interno di un incubatore uovo. Incubare le uova per 48 ore a 36 ° C e 50% di umidità.
2. Far cadere il CAM e apertura le uova
- Raccogliere le uova da incubatrice. Luogo uova in portauova, timbrato rivolta verso l'alto, e portare alla cappa a flusso laminare.
- Spegnere le luci in camera e il cappuccio.
- Tenere l'estremità stampata di uovo legge....
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Risultati
Immagini rappresentative di passaggi chiave nel protocollo sono mostrati qui. Figura 1A mostra l'uso del candler di visualizzare l'embrione in via di sviluppo, il sacco aereo, e la vascolarizzazione della CAM. Figura 1B-1C mostrano il processo di caduta del CAM facendo i due fori e quindi applicando pressione negativa con il bulbo della sicurezza, e la Figura 1D mostra una cancellati correttamente CAM con una bolla d'aria sotto il foro matit.......
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Discussione
Diversi passaggi chiave di questo protocollo molto probabilmente rappresentano il miglioramento della sopravvivenza embrionale così come una maggiore affidabilità della crescita tumorale. Lasciando il CAM lontano dal serbatoio applicando aspirazione al sacco aereo è meno invasivo rispetto ad altri metodi esistenti (utilizzando un ago per rimuovere l'albumina dall'uovo, smussa, ecc). Utilizzando una puntina sterile per creare due piccoli fori necessari per questo metodo è la parte più impegnativa del protocollo. .......
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Dichiarazioni
A.S. riceve finanziamenti dall'azienda farmaceutica Advaxis per sostenere uno studio clinico avviato da un sperimentatore.
Ringraziamenti
A.S. è stato parzialmente supportato da sovvenzioni del National Institutes of Health (NIH), del National Institute of Dental and Craniofacial Research (5R03DE021741-02) e del National Cancer Institute (1K08CA154963-01A1).
L'Howard Hughes Medical Institute ha fornito finanziamenti per M.L. attraverso il programma HHMI Medical Research Fellows.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Uova incubate Premium | Charles River | N/A | http://www.criver.com/files/pdfs/avian/av_c_spf_egg_price_list.aspx |
| Incubatrici per uova | GQF | Hova-Bator 2362N | |
| Vassoi per uova rotanti | GQF | 1611 Girauova automatico Candelabro | |
| uova | Lyon | Hi-Power 950-070 | |
| Utensile rotante Dremel 100 con disco da taglio 15/16 | Dremel | 100-N/7 | |
| Pinze sterili, perno di spinta, forbici da dissezione, nastro | |||
| Matrigel | BD Biosciences | 356234 | |
| Fiale criogeniche, filettatura esterna con rondella in silicone | Corning | 430659 | |
| Collagenasi da Clostridium histolyticum | Sigma | C9891 |
Riferimenti
- Sangiovanni, A., et al. Increased survival of cirrhotic patients with a hepatocellular carcinoma detected during surveillance. Gastroenterology. 126 (4), 1005-1014 (2004).
- Lopez, P. M., Villanueva, A., Llovet, J. M.
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Ristampe e permessi
