Descriviamo qui come preparare a medio-bone condizionata (BCM) e testare la sua attività in vitro.
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Articolo metodologico
Bone mezzo condizionato: Preparazione e Bioassay
In questo articolo
Sommario
Abstract
Innesti ossei autologhi sono ampiamente utilizzati in chirurgia orale e maxillofacciale, ortopedia, traumatologia e. Innesti ossei autologhi non solo sostituire l'osso mancante, ma anche sostenere il complesso processo di rigenerazione ossea. Questo comportamento favorevole autoinnesti è attribuita a tre caratteristiche: osteoconduttività, osteogenicity e osteoinduttività. Tuttavia, c'è un altro aspetto: Bone Innesti rilasciare una miriade di molecole, tra cui i fattori di crescita, che può indirizzare le cellule mesenchimali coinvolte nella rigenerazione ossea. Le proprietà paracrini di innesti ossei possono essere studiati in vitro con l'uso del mezzo-bone condizionata (BCM). Qui vi presentiamo un protocollo su come preparare medie osso condizionata da nativo corticale maiale osso, e l'osso che ha subito trattamenti termici o demineralizzazione. Le celle possono essere direttamente esposti alla BCM o seminate su biomateriali, come membrane di collagene, precedentemente ammollati con BCM. Noi diamo esempi in vitro bioassays con cellule mesenchimali sull'espressione di TGF-β geni regolati. I protocolli presentati dovrebbero incoraggiare a rivelare ulteriormente gli effetti paracrini di innesti ossei durante la rigenerazione ossea e aprire un percorso per la ricerca traslazionale nel vasto campo della chirurgia ricostruttiva.
Introduzione
Osso autologo è ampiamente utilizzato per colmare difetti che si sono verificati in conseguenza di malformazioni, resezione chirurgica, chirurgia ricostruttiva trauma, e prima dell'impianto posizionamento 1,2. Comprendere i principi biologici di come innesti ossei sostenere il processo di consolidamento del trapianto non è solo la chiave per capire il motivo per cui autologhi sono considerati il gold standard in chirurgia ricostruttiva, è anche bionico per la migliore progettazione di sostituti ossei 3. Eppure, il consolidamento del trapianto è più veloce con osso autologo rispetto alle sostituti ossei 4,5. Pertanto, è imperativo ....
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Protocollo
1. BCM Preparazione
- Ottenere mandibole maiale dal macellaio locale più fresco possibile. Mettere le mandibole su una superficie stabile e rilasciare un lembo a spessore completo con particolare attenzione a non lasciare alcuna tessuti molli o periostio attaccato all'osso. Lavorare in un ambiente pulito senza la necessità di lavorare sotto cappa a flusso.
- Una volta che un lembo a spessore completo viene rilasciato, utilizzare un raschietto osso per raccogliere i frammenti ossei dal lato vestibolare. Si prega di notare che il raschietto osso deve essere forte. Maneggiare con forza il raschietto osso e con lunghi movimenti raccogliere l'osso....
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Risultati
Bone media condizionata è preparato da freschi frammenti ossei suina. Panoramica generale del processo per preparare BCM e utilizzare biomateriali in combinazione con BCM è mostrato in Figura 1 e Figura 2 rispettivamente. Durante la preparazione BCM, è importante ottenere grandi frammenti ossei con movimenti lunghi come brevi movimenti o molto piccoli frammenti ossei può influenzare la qualità del BCM finale. Qualità di BCM può essere controllata analizzando l'espressione genica di .......
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Discussione
Medio-Bone condizionata riflette l'attività rilasciata di innesti ossei durante le prime fasi di rigenerazione ossea. Il protocollo qui descritto può essere adattato per studiare la risposta di diversi tipi di cellule coinvolte nella rigenerazione ossea. Inoltre, il protocollo può essere utilizzato per preparare medium condizionato da riempitivi osso o osso trasformati. I metodi sono facili da eseguire e si basano su un concetto semplice: i fattori rilasciati da varie all'osso autologo ed elaborati. Capire come .......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare. Jordi Caballé-Serrano ha ricevuto una borsa di studio dalla Fondazione of Dental Research and Education, Basilea, Svizzera.
Ringraziamenti
Gli autori desiderano ringraziare Catherine Solioz per la sua abile assistenza.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Mandibole di maiale | Bucher | ||
| Raschietto per ossa | Hu-Friedy | PPBUSE2/36 | |
| Antibiotici & Antimicotici | All life Technologies | 15240-062 | |
| Membrane di collagene (Bio-Gide) | Geistlich | ||
| Fetale Siero di vitello | Invitrogen Corporation | 16030074 | |
| DMEM | Invitrogen Corporation | 21885-025 | |
Kit di isolamento dell'RNA puro | Roche | ||
| Transcriptor First Kit di sintesi di cDNA a filamento | Roche | 4379012001 | |
| Primer Microsynth | |||
| SYBR Verde (per Q-RT-PCR) | Roche | 4673484001 | |
| PBS | Roche 11666789001 |
Riferimenti
- Buser, D. Long-term Stability of Early Implant Placement with Contour Augmentation. Journal of dental research. , (2013).
- Chiapasco, M., Casentini, P., Bone Zaniboni, M. augmentation procedures in implant dentistry. The International jour....
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Ristampe e permessi
