Qui, presentiamo un protocollo per l'incapsulamento di cellule cataboliche, che consumano lipidi per la produzione di calore nel tessuto adiposo intra-addominale e aumentano la dissipazione di energia nei topi obesi.
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Articolo metodologico
Incapsulamento termogenico preadipocytes al trapianto nel tessuto adiposo Depositi tessuti
In questo articolo
Sommario
Abstract
Incapsulamento delle cellule è stato sviluppato per intrappolare cellule vitali all'interno delle membrane semi-permeabili. Le cellule incapsulate trapiantate possono scambiare metaboliti a basso peso molecolare in tessuti dell'ospite trattato per conseguire sopravvivenza a lungo termine. La membrana semipermeabile permette innestato cellule incapsulate per evitare il rigetto da parte del sistema immunitario. La procedura di incapsulamento è stato progettato per consentire un rilascio controllato di composti bioattivi, come l'insulina, altri ormoni e citochine. Qui si descrive un metodo per l'incapsulamento di cellule catabolici, che consumano lipidi per la produzione di calore e la dissipazione di energia (termogenesi) nel tessuto adiposo intra-addominale di topi obesi. L'incapsulamento di cellule catabolici termogenica potrebbe essere potenzialmente applicabili alla prevenzione e il trattamento dell'obesità e il diabete di tipo 2. Un'altra potenziale applicazione di cellule catabolici può includere la disintossicazione da alcool o altri metaboliti tossici e inquinanti ambientali.
Introduzione
L'aumento dell'incidenza delle malattie croniche 1 ha stimolato studi sul trapianto di popolazioni di cellule terapeutiche 2. Le cellule staminali singenici o allogeniche sono i tipi di cellule più comunemente usati per queste applicazioni 2. Tuttavia, questi trattamenti non consentono il controllo della differenziazione e migrazione delle cellule staminali dopo l'impianto e non sono convenienti. Il trapianto di cellule geneticamente modificate con funzioni benefiche anticipa migliorare il trattamento di molte malattie. Tuttavia, le modifiche genetiche di cellule vengono riconosciuti dal sistema immunitario dell'ospite....
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Protocollo
Il protocollo di studio è stato approvato da The Ohio State University comitati etici. Gli esperimenti sugli animali sono stati approvati dal protocollo IACUC. Tutte le procedure sono state eseguite sotto l'armadio di livello 2 di biosicurezza con flusso laminare. Abbiamo seguito tutti i requisiti e le procedure di sicurezza standard. La tecnica di microincapsulazione per la preparazione di microcapsule è stata eseguita come descritto 17, 18.
1. Preparativi di materiali
- Preparare 10 ml di 2% di soluzione di alginato di sodio in soluzione salina fisiologica autoclavato (0,9% NaCl in acqua). Preparare 0,05% soluzio....
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Risultati
La Figura 1 mostra che ogni fase della produzione microsfere può essere controllato al microscopio. La Figura 2A mostra come co-coltura adipociti con un monostrato di cellule incapsulate. Figura 2B è un esempio rappresentativo di uno studio quantitativa utilizzando adipociti / microcapsule co-culture sono stati descritti nella sezione 5. Lisati degli adipociti sono stati analizzati usando Western Blot. Cellule incapsulate non sono state analizzate in questo esperimento........
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Discussione
Vari metodi sono stati utilizzati per incapsulare cellule, comprese l'essiccazione, estrusione, ed emulsione 19. In questo metodo, le perline alginato vengono estrusi attraverso un ago, poi rivestito con PLL e il nucleo alginato sarà sciolto per completare l'incapsulamento. Anche se questo metodo è stato usato per anni, formazione delle perline con la dimensione desiderata e la forma sferica è ancora difficile. La dimensione delle capsule è fortemente dipendente dalla viscosità della soluzione di algi.......
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Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarato.
Ringraziamenti
Vorremmo ringraziare Jennifer Petrosino e David Disilvestro aiuto editoriale. Questa ricerca è stata sostenuta dal Premio numero 20020728 del consiglio Egg americano e Premio numero 10040042 da Novo Nordisk Farmaceutici, nonché dalla Food Innovation Center, Ufficio per gli Affari Internazionali, Center for Advanced Functional Foods ricerca, e l'imprenditoria a OSU, nonché la National Science Foundation concessione CEE-0914790 (LJL). Il progetto descritto è stato sostenuto dal Premio Numero R21OD017244 (OZ) e UL1RR025755 (OSUCCC) dal Centro Nazionale per la Ricerca Risorse, finanziato dall'Ufficio del Direttore, National Institutes of Health (OD) e sostenuto d....
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Dispositivo di incapsulamento (VAR V1) | Nisco | LIN-0042 | Nessuno |
| Pompa a siringa KD scientific | KD scientific | 780100Y | Nessuno |
| Microscopio Olympus | Olympus Optical | IX70-S8F2 | Nessuno |
| Alginato di sodio | Sigma | MKBP8122V | Nessuno Bromuro |
| di poli-L-lisina (PLL) | Sigma | 020M5006V | Nessuno |
| Cloruro di calcio | Sigma | SLBJ2662V | Nessuno |
| Citrato di sodio tribasico diidrato | Sigma | 030M0200 | Nessuno |
| Cloruro di sodio | Sigma | SLBD2595V | Nessuno Gel |
| Mini-PROTEAN TGX | Bio-Rad | 456-1093 | Nessuno |
| Anticorpo primario ATGL (da coniglio) | Segnalazione cellulare | 2138S | Nessuno |
| Anticorpo secondario (anti coniglio) | LI-COR | 926-68071 | Nessuno |
| Tampone per test di radioimmunoprecipitazione (RIPA) | Boston BioProducts | D25Y6Z | Nessuno |
| Tamponato con fosfato soluzione salina (PBS) | Sigma | RNBD2893 | Nessuno |
| Tripsina | Gibco | 25200-056 | Nessuno |
| Cortizone 10 unguento anti-prurito | Cortizone 10 | C4029138 | Nessuno |
| Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) | Gibco | 11965-092 | Nessuno |
| Siero neonato di vitello (CS) | Sigma | N4762 | Nessuno |
| Siero fetale bovino (FBS) | Sigma | F4135 | Nessuno |
| 3-Isobutil-1-metilxantina (IBMX) | Sigma | I0516 | Nessuno |
| Desametasone | Sigma | D4902 | Nessuno |
| Insulina (bovina) | Sigma | I5879 | Nessuno |
| Compresse da cocktail con inibitore della proteasi | Roche | 4693159001 | Nessuno |
Riferimenti
- Vogeli, C., et al. Multiple chronic conditions: prevalence, health consequences, and implications for quality, care management, and costs. Journal of general internal medicine. 22, Suppl 3. 391-395 (2007).
- Vija, L., et al.
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Ristampe e permessi
