Il modello di trombosi indotta da FeCl3 nei topi è descritto qui. Viene presentato un metodo per monitorare la crescita dei trombi mediante osservazione al microscopio intravitale su un vaso mesenterico e mediante misurazione del flusso sanguigno nell'arteria carotide.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Cloruro ferrico-indotta Trombosi modello murino sulla carotide e Mesentere Vessel
In questo articolo
Sommario
Abstract
La trombosi grave e le sue conseguenze ischemiche come l'infarto del miocardio, l'embolia polmonare e l'ictus sono i principali problemi di salute in tutto il mondo. La lesione da cloruro ferrico è ormai una tecnica ben consolidata per indurre in modo rapido e preciso la formazione di trombi in vene esposte o arterie di piccolo e grande diametro. Questo modello ha svolto un ruolo chiave nello studio della fisiopatologia della trombosi, nella scoperta e validazione di nuovi farmaci antitrombotici e nella comprensione del meccanismo d'azione di questi nuovi agenti. Qui viene presentata l'implementazione di questa tecnica su un vaso mesenterico e un'arteria carotide nei topi. Il metodo descrive come marcare i leucociti e le piastrine circolanti con un colorante fluorescente e osservare, mediante microscopia intravitale sul mesentere esposto, il loro accumulo sulla parete del vaso lesionato che porta alla formazione di un trombo. Sull'arteria carotide, l'occlusione causata dalla formazione del coagulo viene misurata monitorando il flusso sanguigno con una sonda Doppler.
Introduzione
Lo studio dei meccanismi coinvolti nello sviluppo della trombosi e la valutazione dell'efficacia di farmaci anti-trombotici richiede ben consolidata modelli animali sperimentali. Grandi modelli animali sono stati i primi ad essere usati in quanto forniscono grandi vasi più simile agli esseri umani dei roditori 1. Tuttavia, costo elevato, le strutture più grandi richieste e la difficoltà nel manipolare geneticamente sono i principali svantaggi del loro utilizzo e grandi animali ora sono solo gli studi preclinici in ritardo una volta test preliminari sui roditori hanno dato risultati conclusivi 2. Con la vasta disponibilità di transgenici e kn....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
Tutti gli esperimenti su animali sono stati approvati dalla Alfred Medical Research and Education Precinct comitato etico degli animali (E / 1534/2015 / B). Tutte le operazioni chirurgiche sono stati eseguiti in anestesia totale e gli animali non hanno esperienza del dolore in qualsiasi momento. Tutti gli esperimenti descritti sono mancato recupero.
1. Preparazione
- Tagliare bande sottili di carta filtro (1 mm x 2 mm).
- Appena preparare 2 soluzioni di cloruro ferrico del 4% (w / v) e il 6% (w / v) diluito in acqua deionizzata. Preparare una soluzione rodamina 6G 0,3% in PBS, filtrata attraverso 0,22 micron.
- Ta....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
La fluorescenza intravitale osservazione al microscopio del mesentere rivelerà l'accumulo di rodamina 6G etichettato piastrine e dei leucociti lungo la parete del vaso feriti da FeCl 3. La formazione progressiva di un trombo parziale è monitorato in un recipiente mesentere 200 micron (Figura 1). Un trombo appare lentamente ed è chiaramente identificabile dopo il primo minuto di esposizione a FeCl 3 (figura 1, t = 60 sec). 40 secondi dopo la rimozione della cart.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
Il cloruro ferrico trombosi indotta modello è uno strumento di ricerca eccellente. Come mostrato in questo studio, è estremamente facile da implementare e quando usato in combinazione con la microscopia intravitale o Doppler flussimetro, fornisce un buon controllo in tempo reale di formazione di trombi. Regolazione del tempo di esposizione e la concentrazione di FeCl 3, offre anche la possibilità di produrre trombi o non-occlusive o occlusive.
Tuttavia, questo metodo ha anche alcu.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori vorrebbero riconoscere il supporto tecnico da Joy Yao e il Dr. Karen Alt, così come i finanziamenti del NHMRC e NHF.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Carta per cromatografia Whatman | GE Healthcare | 3030917 | |
| Cloruro di ferro (III) 40% (p/v) | VWR | 24212.298 | |
| Rodamina 6G | Sigma | R4127 | |
| Microscopio invertito | Olympus | IX81 | |
| Olympus | XM10 | ||
| Misuratore di portata Doppler | Transonic | TS420 | |
| Sonda di flusso nano-doppler | Transonic | 0.5 PBS | |
| Ketamina | Hospira | 0409-2051-05 | |
| Xilazina (Rampun) | Bayer | 75313 | |
| Piastra di Petri | Sarstedt | 82.1472 | |
| Siringa da insulina (29 G) | BD Ultra-Fine | 326103 | |
| Applicatori con punta in cotone | BSN medical | 211827A | |
| Suture dysilk Dynek Dynek Dysilk Dynek | Ltd | CS30100 | |
| Soluzione salina tampone fosfato di Dulbecco (PBS) | Gibco life technologies | 21600-069 | |
| Termoforo | Kirchner | T60 |
Riferimenti
- Leadley, R. J., Chi, L., Rebello, S. S., Gagnon, A. Contribution of in vivo models of thrombosis to the discovery and development of novel antithrombotic agents. J Pharmacol Toxicol Methods. 43 (2), 101-116 (2000).
- Johnson, G. J., Griggs, T. R., Badimon, L.
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
