Microdialisi è una tecnica comunemente usata nella ricerca delle neuroscienze. Pertanto sonde commerciali sono in gran demand.In questo lavoro un gruppo sonda è spiegato in dettaglio per costruire una concentrica, sonda di microdialisi affidabile, su misura per meno di $ 10.
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Sommario
Abstract
Microdialisi è una tecnica comunemente usata nella ricerca delle neuroscienze. Pertanto sonde commerciali sono molto richiesti per monitorare i cambiamenti fisiologici, farmacologici e patologici nel liquido cerebrospinale. Purtroppo, le sonde commerciali sono costosi per i gruppi di ricerca nelle istituzioni pubbliche. In questo lavoro, un gruppo sonda è spiegato in dettaglio per costruire una concentrica, sonda di microdialisi affidabile, su misura per meno di $ 10. La sonda microdialisi costituito da una membrana in polisulfone con un cut-off molecolare di 30 kDa. Sonda in vitro recuperi di sostanze aventi diverso peso molecolare (nell'intervallo 100-1,600 Da) e diverse proprietà fisico-chimiche sono confrontati. La sonda produce un recupero in vitro di circa il 20% per il piccoli composti glucosio, lattato, acetilcolina e ATP. In vitro recuperi per neuropeptidi con un peso molecolare tra 1.000-1.600 Da pari a 2-6%. Così, mentre il w molecolare superioreotto dei neuropeptidi abbassato in valori di recupero vitro, la dialisi di composti nell'intervallo inferiore (fino a 500 Da) di pesi molecolari non ha grande impatto sul tasso di recupero in vitro. Il presente metodo permette l'utilizzo di una membrana di dialisi con un altro valore di cut-off e materiale della membrana. Pertanto, questo gruppo sonda misura ha il vantaggio di flessibilità sufficiente per dializza sostanze in un ampio intervallo di peso molecolare. Qui, si introduce una sonda microdialisi con una lunghezza scambio di 2 mm, che è applicabile per microdialisi in topo e ratto regioni del cervello. Tuttavia, le dimensioni della sonda possono essere facilmente adattati per lunghezze di cambio più grandi per essere utilizzato in animali più grandi.
Introduzione
Microdialisi è una tecnica comunemente usata nella ricerca delle neuroscienze. Nel corso degli ultimi 50 anni, la tecnica della microdialisi minimal-invasiva è stato continuamente migliorato per diventare un metodo consolidato per monitorare le concentrazioni locali di piccole composti con peso molecolare nello spazio extracellulare. Quasi ogni fluido tessuto interstiziale può essere indagato in animali liberi di muoversi.
Gaddum introdotto la tecnica push-pull nel 1960. Ha modificato un approccio da Feldberg et al. In cui tubocurarina stato perfuso attraverso una cannula che termina nel ventricolo laterale e raccolta dell'ef....
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Protocollo
1. Preparazione PTFE-tubing
- Accorciare PTFE tubo nel 2,5 centimetri pezzo. Utilizzare una carta scala per stimare le dimensioni fisiche. (Si veda la Figura 3a)
- Tagliare una desinenza ad angolo per facilitare il collegamento del tubo di uscita. (Si veda la Figura 3a)
- Irruvidire PTFE-tubi mediante l'uso di carta vetrata per consentire aderente della colla epossidica.
2. Preparazione silice fusa
- Accorciare silice fusa in 2,25 centimetri pezzo. (Si veda la Figura 3a)
3. Inserimento della silice fusa in PTFE-t....
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Risultati
La sonda microdialisi misura concentrica costituito da una membrana in polisulfone con un cut-off molecolare di 30 kDa. Il gruppo sonda è illustrato nella figura 3.
E 'mostrato un recupero in vitro per la metaboliti piccola energia glucosio (180.16 Da) e lattato (112.06 Da) di 19.10 ± 1,2% e 21,2 ± 1,6%, rispettivamente. Per acetilcolina carica positiva con un peso molecolare di 181.66 Da, ha mostrato un valore di recupero in vitro di 22,6 ± 1,4%. ATP c.......
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Discussione
La Figura 3 mostra un gruppo sonda esemplare. Correggere le dimensioni interne ed esterne di diametro devono essere strettamente monitorati per tubo (OD 1,6 millimetri; ID 350 micron), silice fusa (OD 105 micron; ID 40 micron) e la membrana di dialisi (OD 245 micron; ID 210 micron). E 'anche importante mantenere uno spazio tra la membrana e silice fusa (105 micron) e tra la membrana e il tubo (105 micron) pure. Se i valori differiscono, la pressione nella sonda può salire e causare perdite della mem.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori sono grati a G. Barka (SunChrom GmbH, Friedrichsdorf, Germania) per il suo supporto e per aver fornito la colla epossidica. Inoltre, gli autori ringraziano Fresenius Medical Care (Bad Homburg, Germania) per la fornitura dell'emodiafiltro capillare FXCorDiax. Il finanziamento è stato ottenuto dall'Università Goethe di Francoforte.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Colla epossidica | SunChrom GmbH, Fiedrichsdorf, Germania | ||
| Silice fusa ID 40 µ m OD 105 µ m | Ziemer-Chromatographie, Mannheim, Germania | Art. No: 6.040105 | |
| Membrana in polisulfone (filtro per emodialisi FX Cor Diax 600) | Fresenius Medical Care AG & Co. KGaA, Bad Homburg, Germania | REF: F00001593 | |
| Colla cianocrilata (Pattex® supercolla plastica) | Henkel AG&Co. KGaA, Dü sseldorf, Germania | ||
| Tubo TEFLON 1,6 x 0,35 mm | SunChrom® GmbH, Friedberg, Germania | Art. No: 969-195.219 | |
| Bisturi (Piuma® Lama chirurgica n. 10) | pfm medical ag, colonia, Germania | Art. No: 07310 | |
| Microscopio | MEIJI Techno | EMZ-8TR | |
| Cannula da 30 G x 11" (0,3 x 25 mm) Sterican® Z | B.Braun Melsungen AG, Melsungen, Germania | REF: 9324500 | |
| 25 G x 11/2" (0,5 x 40 mm) cannula 100 Sterican® | B.Braun Melsungen AG, Melsungen, Germania | REF: 9186166 | |
| Penna fine (Stabilo point 88 fine 0.4) | Schwan-STABILO Schwanhä uß er GmbH & Co. KG | Art. No: 88/36 | |
| Colla a caldo (Stick di colla ULTRA Power x 11 mm) | Steinel® GmbH, Herzebrock-Clarholz, Germania | Art. No: 4007841046910 | |
| Carta vetrata P60 230 x 280 | Robert Bosch GmbH, Gerlingen-Schillerhö he, Germania | Codice prodotto: 2608605397 |
Riferimenti
- Feldberg, W., Malcom, J. Experiments on the site of action of tubocurarine when applied via the cerebral ventricles. J Physiol. 149, 58-77 (1959).
- Gaddum, J. H. Push-pull cannulae. J Physiol. 155 (1 P), (1961).
- Bito, L., Davson, H., Levin, E., Murray, M., Snider, N.
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Ristampe e permessi
