Molti tipi di tumori cerebrali umani sono localizzati in regioni specifiche all'interno del cervello e sono difficili da coltivare in coltura. Questo protocollo affronta il ruolo del microambiente tumorale e studia nuovi trattamenti farmacologici analizzando le cellule tumorali cerebrali primarie fluorescenti che crescono in una fetta di cervello di topo organotipico.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Un tumore cerebrale / organotipica fetta sistema di co-coltura per lo Studio microambiente tumorale e mirata terapie farmacologiche
In questo articolo
Sommario
Abstract
I tumori cerebrali sono una delle principali cause di morbilità e mortalità legate al cancro. Lo sviluppo di nuove terapie per questi tumori è difficile, poiché molti di questi tumori non sono facilmente coltivabili in condizioni di coltura standard. Le colture di neurosfere in condizioni prive di siero e gli xenotrapianti ortotopici hanno ampliato la gamma di tumori che possono essere mantenuti. Tuttavia, molti tipi di tumori cerebrali rimangono difficili da propagare o studiare. Ciò è particolarmente vero per i tumori cerebrali pediatrici come gli astrocitomi pilocitici e i medulloblastomi. Questo protocollo descrive un sistema che consente di coltivare tumori cerebrali umani primari in coltura. Questo test quantitativo può essere utilizzato per studiare l'effetto del microambiente sulla crescita tumorale e per testare nuove terapie farmacologiche. Questo protocollo descrive un sistema in cui le cellule tumorali cerebrali marcate in fluorescenza vengono coltivate su una fetta di cervello organotipica di un topo giovane. La risposta delle cellule tumorali ai trattamenti farmacologici può essere studiata in questo saggio, analizzando i cambiamenti nel numero di cellule sulla fetta nel tempo. Inoltre, questo sistema può affrontare la natura del microambiente che normalmente favorisce la crescita dei tumori cerebrali. Questo test di co-coltura di fette organotipiche di tumore cerebrale fornisce un sistema propizio per testare nuovi farmaci su cellule tumorali umane all'interno di un microambiente cerebrale.
Introduzione
Recenti ricerche cancro ha fatto progressi significativi nell'identificazione mutazioni genetiche, modifiche molecolari e possibili trattamenti per una varietà di tumori cerebrali. Nonostante questi progressi, tumori cerebrali rimangono una delle principali cause di mortalità cancro-correlata per adulti e bambini. Fattori limitanti nella ricerca tumore cerebrale includono la disponibilità limitata di campioni primarie e linee cellulari e la difficoltà di replicare microambiente cerebrale unico ed eterogenei in sistemi sperimentali accessibili. Per molti tumori cerebrali le condizioni necessarie per mantenere le cellule tumorali nel tempo non sono ancora noti. Anc....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
Etica Dichiarazione: La seguente procedura che coinvolge soggetti animali sono stati fatti in conformità con le linee guida del National Institutes of Salute e sono stati approvati dal Cancer istituzionale cura e l'uso degli animali Comitato Dana-Farber. Tutti i soggetti umani lavoro è stata valutata da i Institutional Review Comitati del Brigham and Women Hospital e Dana-Farber Cancer Institute, e di Stanford per un uso appropriato, che il consenso informato è stato ottenuto da tutti i soggetti quando necessario e le opportune misure rinuncia obblighi previsti è stato ottenuto per gli studi il minimo rischio.
Timeline di Fetta Cultur....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
Questa sezione esemplifica il tipo di risultati da aspettarsi dalla utilizzando il tumore cerebrale / organotipica fetta co-coltura per indagare preferenza microambiente regionale e per testare nuove terapie. Abbiamo dimostrato che il saggio è progettato per replicare il microambiente per i tumori cerebrali, come l'organizzazione dei tessuti e proliferative della fetta viene mantenuta (Figura 3). Abbiamo anche dimostrato che un aumento del numero di cellule tumorali sulla fetta nel tempo può in part.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
Questo protocollo descrive come le cellule tumorali cerebrali possono essere fluorescente e piastrate su una sezione sagittale del cervello di un topo P6 e poi monitorati per una settimana in coltura. Questo tumore cerebrale / organotipica assay fetta co-coltura può essere utilizzato per determinare l'effetto del microambiente regionale sul numero delle cellule tumorali e può essere utilizzato anche come un sistema per misurare l'efficacia di nuovi farmaci sulla crescita tumorale umano. Precedenti studi hanno ut.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Nessuno degli autori ha interessi in competizione o in conflitto.
Ringraziamenti
Questo lavoro è supportato da sovvenzioni del NIH (P01CA142536 a RAS, T32CA009361 a DPY) e della fondazione Pediatric Low Grade Astrocytoma.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| HEPES | Invitrogen | ||
| glucosio | invitrogeno | 17502048 | |
| pennicillina streptomicina | Life Technologies | 15140-122 | |
| HBSS | Life Technologies | 14185-052 | |
| B-27 | Life Technologies | 17504-044 | |
| N2 | Life Technologies | 17502-048 | |
| Glutamax | Life Tecnologie | 35050061 | |
| Neurobasal-A- Medium meno rosso fenolo | Invitrogen | ||
| Promega | V2111 | basso punto di fusione | |
| Milipore | PICM0RG50 | ||
| laminina | Invitrogen | 23017015 | |
| Cm-DiI | Invitrogen | V22888 | |
| EDU (Etichettatura e rilevamento) | Tecnologie di vita | c10337 | |
| Microsfere | Life Technologies | F-21010 | |
| Vibratome | Leica | ||
| Software Nikon Eclipse Ni C2si | |||
| ImageJ | |||
| Occhiali di copertura da 5 mm | Fisher Scientific | 64-0700 (CS-5R) |
Riferimenti
- Heddleston, J. M., et al. Glioma stem cell maintenance: the role of the microenvironment. Curr Pharm Des. 17 (23), 2386-2401 (2013).
- Sasai, K. Shh pathway activity is down-regulated in cultured medulloblastoma cells: implications fo....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
Esplora altri articoli
Analisi del microambiente tumoralecellule primarie di tumore cerebrale umanopreparazione di fette di cervello di topocellule tumorali marcate con fluorescenzasaggio di risposta al trattamento farmacologicopreparazione del terreno di coltura per fetteanalisi di imaging confocalemisurazione della proliferazione delle cellule tumoralitest di terapia farmacologica mirata
