Murino Dermal fibroblasti Isolation di FACS

Graham G. Walmsley; Zeshaan N. Maan; Michael S. Hu; David A. Atashroo; Alexander J. Whittam; Dominik Duscher; Ruth Tevlin; Owen Marecic; H. Peter Lorenz; Geoffrey C. Gurtner; Michael T. Longaker

doi:10.3791/53430

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Articolo metodologico

Murino Dermal fibroblasti Isolation di FACS

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DOI:

10.3791/53430

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7 gennaio 2016

Graham G. Walmsley^*¹^,² , Zeshaan N. Maan^*¹ , Michael S. Hu^*¹^,²^,³ , David A. Atashroo¹ , Alexander J. Whittam¹ , Dominik Duscher¹ , Ruth Tevlin¹ , Owen Marecic¹ , H. Peter Lorenz¹ , Geoffrey C. Gurtner¹ , Michael T. Longaker¹^,²

¹Hagey Laboratory for Pediatric Regenerative Medicine, Department of Surgery, Division of Plastic and Reconstructive Surgery, Stanford University School of Medicine, ²Institute for Stem Cell Biology and Regenerative Medicine, Stanford University School of Medicine, ³Department of Surgery, John A. Burns School of Medicine, University of Hawai'i

^* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Il comportamento dei fibroblasti è alla base di uno spettro di entità cliniche, ma rimangono scarsamente caratterizzate, in gran parte a causa della loro intrinseca eterogeneità. La ricerca tradizionale sui fibroblasti si basa sulla manipolazione in vitro, mascherando il comportamento dei fibroblasti in vivo. Descriviamo un protocollo basato su FACS per l'isolamento di fibroblasti cutanei di topo che non richiede colture cellulari.

Abstract

I fibroblasti sono il tipo cellulare principio responsabili della secrezione della matrice extracellulare e sono una componente critica di molti organi e tessuti. Fibroblasti fisiologia e patologia alla base uno spettro di entità cliniche, inclusi fibrosi in organi multipli, cicatrici ipertrofiche seguenti ustioni, perdita della funzione cardiaca dopo ischemia, e la formazione di stroma cancro. Tuttavia, i fibroblasti rimangono un tipo di cellula poco caratterizzato, in gran parte a causa della loro eterogeneità. Metodi esistenti per l'isolamento dei fibroblasti richiedono tempo in coltura cellulare che influenza profondamente il fenotipo e il comportamento delle cellule. Di conseguenza, molti studi che hanno valutato fibroblasti biologia basano su manipolazioni in vitro e non colgono accuratamente il comportamento dei fibroblasti in vivo. Per superare questo problema, è stato sviluppato un protocollo basato FACS-per l'isolamento dei fibroblasti dalla pelle dorsale di topi adulti che non richiede di coltura cellulare, così preserving trascrizionale fisiologico e il profilo proteomico di ogni cellula. La nostra strategia consente di esclusione di lignaggi non mesenchimali attraverso un cancello negativo lignaggio (Lin ^-) piuttosto che una strategia di selezione positiva di evitare la preselezione o l'arricchimento di una sottopopolazione di fibroblasti che esprimono marcatori di superficie specifici ed essere il più inclusivo possibile attraverso questo eterogeneo tipo di cellula.

Introduzione

I fibroblasti sono spesso definiti morfologicamente come cellule fusiformi che aderiscono a substrati plastici. I fibroblasti sono il tipo cellulare principio responsabile per la sintesi e il rimodellamento della matrice extracellulare in embrionali e adulte organi ^1. I fibroblasti sono quindi fondamentali per lo sviluppo dei mammiferi e contribuiscono in maniera sostanziale l'ambiente extracellulare che influenza il comportamento della vicina tipi presenti in ogni tessuto e organo cellulari.

I fibroblasti sono anche il tipo di cellula principale dietro un insieme eterogeneo di condizioni mediche che causano enorme peso cli....