Un metodo efficiente per ottenere cellule di grasso dedifferenziato

Sommario

Abbiamo modificato le condizioni per la generazione di cellule DFAT e forniamo qui informazioni riguardanti l'uso di un mezzo di crescita migliorato per la produzione di queste cellule.

Abstract

L'ingegneria dei tessuti e terapia cellulare molto promettenti clinicamente. A questo proposito, cellule multipotenti, come le cellule staminali mesenchimali (MSC), possono essere utilizzati terapeuticamente, nel prossimo futuro, per ripristinare la funzione di organi danneggiati. Tuttavia, diversi problemi tecnici, compresa la procedura altamente invasiva di isolare cellule staminali mesenchimali e l'inefficienza che circonda il loro amplificazione, attualmente ostacolano il potenziale utilizzo clinico di queste modalità terapeutiche. Qui, si introduce un metodo molto efficiente per la generazione di cellule adipose dedifferenziate (DFAT), cellule MSC simili. È interessante notare che le cellule DFAT possono essere differenziate in diversi tipi di cellule, tra cui adipogenico, osteogenico, e le cellule condrogeniche. Anche se altri gruppi hanno precedentemente presentato vari metodi per la generazione di cellule DFAT dal tessuto adiposo maturo, il nostro metodo ci permette di produrre cellule DFAT in modo più efficiente. A questo proposito, abbiamo dimostrato che terreno di coltura DFAT (DCM), integrato con il 20% FBS,è più efficace nel generare cellule DFAT di DMEM, integrati con il 20% FBS. Inoltre, le cellule DFAT prodotte dal nostro metodo di coltura cellulare può essere redifferentiated in diversi tipi di tessuto. Come tale, un modello molto interessante e utile per lo studio di dedifferentiation tessuto è presentato.

Introduzione

Terapia cellulare e ingegneria dei tessuti sono temi caldi nel campo della medicina rigenerativa ^1-5. Mentre queste modalità terapeutiche molto promettenti, diversi problemi tecnici attualmente ostacolano il loro uso clinico. A questo proposito, come nella generazione di cellule iPS, tutte le terapie ingegneria tissutale devono produrre celle libere di trasduzione del gene esterni al fine di mantenere la sicurezza del paziente. Di conseguenza, siamo stati il primo gruppo a produrre con successo cellule umane DFAT ^6. Molti altri gruppi di ricerca hanno poi adottato il nostro metodo per generare cellule DFAT di origine mammiferi ^7-9, ev....

Protocollo

I campioni di grasso sottocutaneo umano sono stati ottenuti da pazienti sottoposti a chirurgia nei dipartimenti di Chirurgia Plastica, Urologia, Chirurgia Pediatrica e Chirurgia Ortopedica dell'Ospedale Nihon dell'Università Itabashi (Tokyo, Giappone). I pazienti hanno dato consenso informato scritto, e il Comitato Etico della Nihon University School of Medicine ha approvato lo studio.

1. Preparazione del tessuto

1. Portare il campione di tessuto dalla sala operatoria al laboratorio.
2. Lavare 1-2 g di tessuto adiposo con 5 ml di PBS (-) a temperatura ambiente (RT), una volta, in un tubo da 50 ml e quindi posizionar....

Risultati

In questo studio, il metodo e il kit di strumenti per la generazione di cellule DFAT stata migliorata (Figura 1). Il nostro metodo permette di generare cellule DFAT utilizzando sia DCM e medie DMEM contenente 20% FBS (Figura 2A). Come tale, abbiamo confrontato l'efficienza di DCM e DMEM nella generazione di cellule DFAT. A questo proposito, DCM migliorata proliferazione cellulare DFAT di tre volte rispetto ai DMEM, indipendentemente dal numero di adipoci.......

Discussione

Adipociti maturi che subiscono in vitro de-differenziazione, un processo noto come la cultura del soffitto, può tornare ad un fenotipo più primitivo e acquisire capacità proliferative. Queste cellule sono indicati come le cellule di grasso dedifferenziato (DFAT). Il potenziale di differenziazione multilineare delle cellule DFAT è stata valutata. Citometria a flusso di analisi e analisi di espressione genica hanno rivelato che le cellule DFAT erano altamente omogenea rispetto ai ASC ^6. Infatti il prof.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
CSTI303-MSC medio	CSTI	87-671	Questo mezzo è definito come DCM nel testo
PBS(-)	Wako	166-23555	Non contiene Mg2+ e Ca2+
DMEM medium	Gibco	11965-092
Siero fetale bovino	Sigma	172012
Collagenasi tipo II	Sigma	C-6885
Forbici	Takasago Medical Industry Co., Ltd	TKZ-F2194-1
Agitatore	TAITEC	Bioshaker V.BR-36
Filtro cellulare Falcon 100 μ m Giallo	CORNING SCIENZE DELLA VITA	DL 352360
Falco 12,5 cm² Pallone rettangolare per colture cellulari con collo inclinato con tappo a vite ventilato blu	CORNING LIFE SCIENCES
ago da 18 G	NIPRO	02-002
Siringa da 20 ml	NIPRO	08-753
Contatore coltro serie Z	COLTRO BECKMAN	383550