Sviluppo e manutenzione di un tumore del paziente preclinici Derivato dello xenotrapianto modello per il Controllo delle Novel Anti-Cancer Therapies

Sommario

Utilizzando i tumori derivati ​​da pazienti in un modello preclinico per via sottocutanea è un ottimo modo per studiare l'efficacia di nuove terapie, scoperta di biomarcatori predittivi, e percorsi resistenti ai farmaci. Questo modello, nel processo di sviluppo di un farmaco, è essenziale nel determinare il destino di molte nuove terapie anti-cancro prima indagine clinica.

Abstract

I modelli di xenotrapianto tumorale derivato da pazienti (PDTX) forniscono una piattaforma necessaria per facilitare lo sviluppo di farmaci antitumorali prima degli studi sull'uomo. Pezzi di tumore umano vengono iniettati per via sottocutanea in topi nudi atimici (immunocompromessi, carenti di cellule T) per creare una banca di tumori e successivamente vengono fatti passare in diverse generazioni di topi al fine di mantenere questi tumori dai pazienti. È importante sottolineare che l'eterogeneità cellulare del tumore originale è strettamente emulata in questo modello, che fornisce un modello clinicamente più rilevante per la valutazione degli studi di efficacia dei farmaci (singolo agente e combinazione), l'analisi dei biomarcatori, le vie di resistenza e la biologia delle cellule staminali tumorali. Alcune limitazioni del modello PDTX includono la sostituzione dello stroma umano con lo stroma di topo dopo la prima generazione nei topi, l'incapacità di studiare gli effetti del trattamento sulle metastasi a causa delle iniezioni sottocutanee dei tumori e la mancanza di valutazione delle immunoterapie a causa dell'uso di topi immunocompromessi. Tuttavia, anche con queste limitazioni, il modello PDTX fornisce una potente piattaforma preclinica nel processo di scoperta dei farmaci.

Introduzione

Il cancro colorettale (CRC) è un contributo significativo ai decessi per cancro negli Stati Uniti. Nel 2015, sono stati stimati 132.700 nuovi casi di CRC con 49,700 morti ^1. Anche se la prognosi nei pazienti con malattia localizzata è eccellente, i pazienti con malattia avanzata hanno scarsi risultati, rendendo questo una delle principali priorità nello sviluppo di nuove terapie. Nonostante livello di regimi di cura chemioterapici e biologici più recenti che vengono distribuite contro questa malattia, c'è stato solo un aumento incrementale della sopravvivenza globale. Di conseguenza, vi è un notevole sforzo nella comprensione delle vie pilota coinvolto....

Protocollo

Etica Dichiarazione: campioni tumorali del colon adenocarcinoma derivati ​​da pazienti sono stati ottenuti da pazienti consenzienti presso la University of Colorado Hospital di secondo un protocollo approvato dalla multipla Institutional Review Board Colorado (08-0439). Tutto il lavoro animale è stato eseguito secondo protocolli animali approvati dalla University of Colorado Denver Istituzionale cura degli animali e del Comitato uso (IACUC, protocollo # 51412 (06) 1E e 96813 (04) 1E).

1. Ricezione e Preparazione sangue del paziente

1. Raccogliere 1 - 2 ml di sangue in una provetta di separazione del sangue / cella contenente citra....

Risultati

Somiglianze di mutazioni comuni nei modelli CRC PDTX e la TCGA

Abbiamo studiato se la percentuale di mutazioni comuni (KRAS, le ANR, BRAF, PIK3CA, APC, CTNNB1 e TP53) nella banca CRC PDTX erano rappresentante per la frequenza di mutazione visto nella popolazione di pazienti CRC. Come mostrato nella Figura 2A (TCGA) e B (CRC banca PDTX), la frequenza di mutazioni in qu.......

Discussione

La piattaforma di scoperta di nuovi farmaci PDTX offre un modello migliorato per le carenze di altri modelli preclinici che sono inaffidabili nel predire attività clinica di nuovi composti. È importante sottolineare che i tumori in questo modello sono biologicamente stabile, mantenere potenziale metastatico, e mostrano simili reattività di droga di generazione in generazione. In questo modello, i tumori paziente derivato vengono iniettate in topi nudi atimici, diversi passaggi, e successivamente utilizzati nella valutaz.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
RPMI o DMEM	Corning	10-040-CV
Penicillina-Streptomicina	Corning	30-002-CI
Aminoacidi non essenziali	Corning	25-025-CI
Siero fetale bovino	Corning	35-010-CV	Scongelamento in -4 gradi C, quindi attivare per 30 minuti a 60 ° C bagnomaria
CPT provetta per sangue	BD vacutainer	362761
Provetta per microcentrifuga	Surelock	A-7002
Soluzione salina tamponata con fosfato	Corning	21-040-CV
Fiale	cyrogenic Cyroking	C0732901
Piatto di taglio tumorale in plastica	Trueline	TR4001
Forbici	Roboz	Pinze RS-5881
Roboz		RS-5135
Matrigel (miscela di proteine gelatinose)	Corning	354234	Conservare a -20 o -80 ° C, quindi scongelare con ghiaccio, non lasciare a RT
10% Tazze di formalina	Protocollo	032-059
Azoto liquido Dewar	Stoccaggio Thermolyne	CY50900
Azoto liquido portatile Dewar	Nalgene	4150-2000
Dimetil solfossido	Fischer	67-68-5
Contenitore di congelamento: Mr Frosty	Nalgene	5100-0001
Alcool isopropilico	Decon	64-17-5
Trocars	Ricerca innovativa dell'America	MP-182
Macchina per anestesia	Patterson Scatola
	Patterson Veterinario
Isoflurane	Vet uno	1038005
F-Air Canister	Bickford Omnicon	80120
Meloxicam	Vet one	5182-90C
Pinze	Fowler	54-100-167
Bilancia	Ohaus	Scout Pro SP601

per anestesia veterinaria