Qui descriviamo una procedura per catturare immagini dal vivo della gastrulazione di Drosophila. Questo ci ha permesso di comprendere meglio la costrizione apicale coinvolta nello sviluppo precoce e di analizzare ulteriormente i meccanismi che regolano i movimenti cellulari durante la modificazione della struttura tissutale.
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Articolo metodologico
Imaging di cellule di figura alterazione e la cella in Movimento Drosophila gastrulation Utilizzando DE-caderina Reporter mosche transgeniche
In questo articolo
Sommario
Abstract
Gastrulation è la prima serie di eventi morfologicamente dinamici che si verificano durante lo sviluppo embrionale di animali multicellulari come Drosophila. Questa alterazione morfologica è anche riconosciuto come epiteliale di transizione mesenchimale (EMT). Disregolazione di EMT è associata a fibrosi e metastasi del cancro. Vi è evidenza emergente che EMT è controllato da una serie di meccanismi molecolari. Come sono noti anche questi, molti geni chiave che controllano la costrizione apicale di essere fattori importanti nella EMT osservato in metastasi del cancro. Come EMT durante Drosophila gastrulazione, le cellule epiteliali possono essere indotte a cambiare la loro forma e essere riprogrammati per reindirizzare il destino della cellula verso diversi altri tipi di cellule. Qui forniamo un metodo di imaging affidabile di Drosophila gastrulazione per saggiare l'avvio di movimenti cellulari morfogenetici e l'identificazione destino delle cellule durante questa fase di sviluppo embrionale. Utilizzando questo metodo, identifichiamo cell riarrangiamento al momento della gastrulazione e dimostrare l'importanza della costrizione apicale durante la gastrulazione usando GFP etichettati DE-caderina.
Introduzione
Gastrulation è la prima serie di eventi morfologicamente dinamici che si verificano durante lo sviluppo embrionale di animali multicellulari come Drosophila 1,2. È interessante notare che, prove emergenti suggerisce che questo processo è regolato attraverso l'interazione tra i meccanismi meccanici e molecolari 3. Inoltre, la transizione epitelio mesenchimale (EMT), che è un processo fondamentale gastrulation, è anche implicato in processi patologici umani come metastasi 4-8. Come sono noti anche questi, molti geni che controllano costrizione apicale di essere fattori chiave per la EMT osservata in metastasi del cancro
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Protocollo
NOTA: Le mosche transgenici utilizzati in questo studio sono i seguenti: DE-cad :: GFP 10.
1. Preparazione del piatto mela
- Preparare una miscela di 12,5 g di agar, 125 mL 100% disponibile in commercio succo di mela, 12,5 g di glucosio, e 375 ml di H 2 O. scaldare la miscela in un forno a microonde e versarlo in un 3 centimetri piatto di coltura cellulare. Conservare la miscela a 4 ° C per un uso futuro.
- Dopo aver preparato la piastra mela, aggiungere un sottile strato di pasta di lievito impastata su di esso per consentire le mosche depongono uova.
2. Embryo Prepar....
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Risultati
Qui vi mostriamo gli eventi gastrulazione dell'embrione Drosophila e una panoramica generale della procedura di preparazione degli embrioni (Figura 1). Le membrane cellulari sono etichettati con DE-caderina :: GFP e immagini dal vivo dei movimenti delle cellule è effettuata al momento della gastrulazione in Drosophila (Figura 2). Dal momento che le mosche DE-caderina GFP ci permettono di visualizzare giunzioni di aderenza delle cellule, siamo in.......
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Discussione
Sebbene abbiamo precedentemente riportato una procedura simile per catturare immagini dal vivo del processo di gastrulazione in Drosophilla1, il metodo che descriviamo qui è dettagliato e facile da tracciare nell'espressione endogena della caderina e quindi è molto utile per lo screening genetico dei fattori chiave coinvolti nella gastrulazione. Per massimizzare il successo di questa procedura di imaging, è essenziale utilizzare un vetrino rientrato. La pressione meccanica a volte provoca la morte emb.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo studio è stato supportato dalla Fondazione Astellas per la Ricerca sui Disturbi Metabolici (HT), dalla Fondazione Scientifica Takeda (HT) e dal Programma supportato da MEXT per la Fondazione di Ricerca Strategica presso le Università Private (HT).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Olio alocarbonico 700 | Sigma | MKBH 5726 | |
| Grasso per vuoto Silicone | Beckman | 335148 | |
| Vetrino coprioggetti | Vetro Matsunami | Spessore No1 | 24 - 36 mm |
| Embryo stariner | Corning Corning3477 | ||
| Bottiglie di plastica Drosophilla Stock Hitec | MKC-100 | ||
| DE-Cadherin knock-in mosche | REF (10) |
Riferimenti
- Haruta, T., Warrior, R., Yonemura, S., Oda, H. The proximal half of the Drosophila E-cadherin extracellular region is dispensable for many cadherin-dependent events but required for ventral furrow formation. Genes Cells. 15 (3), 193-208 (2010).
- Oda, H., Takeichi, M.
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Ristampe e permessi
