Descriviamo un modello murino di ictus indotto dall'occlusione dell'arteria cerebrale media utilizzando una sutura rivestita di silicone. Il protocollo può essere applicato per indurre un'occlusione permanente o un'ischemia temporanea, seguita da riperfusione.
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Articolo metodologico
Induzione di ictus ischemico e di ischemia-riperfusione nei topi mediante la tecnica di occlusione dell'arteria Medio e visualizzazione di Infarct Area
In questo articolo
Sommario
Abstract
La malattia cerebrovascolare è molto diffusa nella popolazione globale e comprende diversi tipi di condizioni, tra cui l'ictus. Per studiare l'impatto dell'ictus sul danno tissutale e per valutare l'efficacia degli interventi terapeutici, sono stati sviluppati diversi modelli sperimentali in una varietà di specie. Includono l'ischemia cerebrale globale completa, l'ischemia globale incompleta, l'ischemia cerebrale focale e l'ischemia cerebrale multifocale. Il modello descritto in questo protocollo si basa sull'occlusione dell'arteria cerebrale media (MCAO) ed è correlato alla categoria dell'ischemia focale. Questa tecnica produce un'ischemia focale costante in una regione rigorosamente definita dell'emisfero ed è meno invasiva di altri metodi. La procedura descritta viene eseguita sui topi, data la disponibilità di diverse varianti genetiche e l'elevato numero di test standardizzati per i topi per aiutare nella valutazione comportamentale e del neurodeficit.
Introduzione
Lo studio di malattie cardiovascolari, come ictus, si basa sull'utilizzo di modelli in vivo. Per comprendere la possibile implicazione di ischemia, tossicità del farmaco, e / o il trattamento, vi è la necessità di utilizzare un modello adatto, standardizzata, affidabile e riproducibile della malattia, che consente studi comparativi tra i gruppi di trattamento. In questo manoscritto, stiamo usando i topi, data la disponibilità di un gran numero di topi transgenici e modelli di valutazione standardizzati. Rastrellando i punteggi per valutare a motore e il comportamento deficit seguenti ictus ischemico sperimentale e il successivo recupero sono stati svilup....
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Protocollo
Tutte le procedure sono state approvate dalla University of Miami Istituzionale cura degli animali e del Comitato uso (IACUC) in conformità con i National Institutes of Health (NIH) le linee guida. è richiesto l'uso di materiale sterile e tecniche asettiche.
1. Preparare l'occlusione di sutura
- Utilizzare una sutura di diametro di 0,21 millimetri per topi tra 20 - 25 g e 0,23 mm per topi tra 25 - 35 g di peso corporeo. La scelta del tipo di suture per la procedura MCAO dipende dal peso degli animali.
- Usando una penna d'argento, segnare la sutura a 9 mm a partire dalla punta rivestito di silicone. Questo ser....
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Risultati
Il percorso di inserimento per la sutura occlusione viene mostrato in Figura 1. La sutura MCAO deve essere instradato verso l'area di occlusione, biforcano in ICA. l'occlusione di successo del MCA porterà a lesioni dei tessuti, visibile attraverso la colorazione TTC. La figura 2 presenta le immagini di colorazione da sham trattati animale (Figura 2A) e da un 60 min MCAO ischemia riperfusione animale (colorazione a 90 minuti o 24 ore dopo.......
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Discussione
L'utilizzo efficace del metodo MCAO descritto è fortemente dipendente dalla comprensione dei cerebrale dell'anatomia flusso sanguigno. Poiché il corretto posizionamento della sutura è difficile distinguere a causa della mancanza di indizi visivi diretti, pratica ripetuta è importante avere il procedimento prima di utilizzarlo per studi investigativi. gittata sistolica dovrebbe essere analizzato per garantire risultati coerenti. L'aggiunta di un sistema laser Doppler può aiutare a determinare l'occlusione.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno concorrenti o conflitti di interesse.
Ringraziamenti
Vorremmo ringraziare il Dr. Lei Chen (Icahn School of Medicine at Mount Sinai, NY) che per primo ha stabilito questo modello nel nostro laboratorio. Supportato in parte da HL126559, DA039576, MH098891, MH63022, MH072567, DA027569 e NSC 2015/17/B/NZ7/02985. Il Dr. Luc Bertrand è supportato in parte da una borsa di studio post-dottorato dell'American Heart Association (16POST31170002).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Sutura MCAO 0,23 mm | Doccol | 702345PK5Re | |
| Sutura MCAO 0,21 mm | Doccol | 702145PK5Re | |
| Penne d'argento | graffette 503205 | ||
| Macchina per anestesia | Vetequip | 901806 | |
| Forbici chirurgiche | Strumento per scienze fini | 14558-09 | |
| Pinze chirurgiche Punta dritta | Fine strumento scientifico | 00108-11 | |
| Pinze chirurgiche punta angolata | Strumento scientifico fine | 00109-11 | |
| Forbici a molla | Strumento scientifico fine | 15000-08 | |
| Sutura in nylon | Braintree scintific | SUT-S 104 | |
| Sutura di chiusura | VWR | 95057-036 | |
| Isoflurano | Piramal | ||
| 2,3,5- Cloruro di trifeniltetrazolio | FisherSci | 50-121-8005 | |
| Blocco cerebrale | Braintree scintific | BS-A 5000C | |
| Lama criostato | VWR | 89202-606 | |
| Opzionale: | |||
| Sistema doppler laser Periflux | Perimed | Periflux 5000 | |
| Unità di monitoraggio | Perimed | PF 5010 - LDPM |
Riferimenti
- Cuomo, O., et al. Antithrombin reduces ischemic volume, ameliorates neurologic deficits, and prolongs animal survival in both transient and permanent focal ischemia. Stroke. 38 (12), 3272-3279 (2007).
- Wauquier, A., Melis, W., Janssen, P. A.
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Ristampe e permessi
Tag
Occlusione dell'arteria cerebrale mediainduzione dell'ictus ischemicomodello di ischemia-riperfusionechirurgia dell'ictus nel topoocclusione dell'arteria cerebralevisualizzazione dell'area di infartoanalisi della colorazione con TTCcolorazione immunofluorescentevalutazione del deficit neurologicomonitoraggio delle cure postoperatorie
