Etichettatura di cancro al seno xenotrapianti derivati ​​da pazienti con tracciabili Reporter per crescita tumorale e metastasi Studi

Colton Hanna; Letty Kwok; Jessica Finlay-Schultz; Carol A. Sartorius; Diana M. Cittelly

doi:10.3791/54944

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Articolo metodologico

Etichettatura di cancro al seno xenotrapianti derivati da pazienti con tracciabili Reporter per crescita tumorale e metastasi Studi

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DOI:

10.3791/54944

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30 novembre 2016

Colton Hanna¹ , Letty Kwok¹ , Jessica Finlay-Schultz¹ , Carol A. Sartorius¹ , Diana M. Cittelly¹

¹Department of Pathology, School of Medicine, University of Colorado Anschutz Medical Campus

In questo articolo

Sommario

Descriviamo un metodo per l'etichettatura stabile di xenotrapianti derivati da pazienti (PDX) con particelle lentivirali che esprimono proteina fluorescente verde e reporter di luciferasi. Questo metodo consente di monitorare la crescita dei PDX nel sito primario, nonché di rilevare metastasi spontanee e sperimentali utilizzando sistemi di imaging in vivo.

Abstract

L'uso di modelli preclinici per studiare la biologia dei tumori e la risposta al trattamento è fondamentale per la ricerca sul cancro. Le linee cellulari umane di lunga data e molti modelli murini transgenici spesso non riescono a ricapitolare gli aspetti chiave delle neoplasie maligne umane. Pertanto, si stanno sviluppando modelli alternativi che rappresentano meglio l'eterogeneità dei tumori dei pazienti e delle loro metastasi. I modelli di xenotrapianto derivati da pazienti (PDX) in cui campioni tumorali resecati chirurgicamente vengono innestati in topi immunocompromessi sono diventati un'alternativa interessante in quanto possono essere trapiantati attraverso più generazioni e riflettono in modo più efficiente l'eterogeneità del tumore rispetto agli xenotrapianti derivati da linee cellulari tumorali umane. Una limitazione all'uso dei PDX è che sono difficili da trasfettare o trasdurre per introdurre reporter tracciabili o per manipolare l'espressione genica. L'attuale protocollo descrive i metodi per trasdurre cellule tumorali dissociate da PDX con un'elevata efficienza di trasduzione e l'uso di PDX marcati per modelli sperimentali di metastasi del cancro al seno. Il protocollo dimostra anche l'uso di PDX marcate in modelli sperimentali di metastasi per studiare il processo di colonizzazione degli organi della cascata metastatica. Le metastasi in diversi organi possono essere facilmente visualizzate e quantificate utilizzando l'imaging bioluminescente in animali vivi o l'espressione di GFP durante la dissezione e negli organi asportati. Questi metodi forniscono un potente strumento per estendere l'uso di più tipi di PDX alla ricerca sulle metastasi.

Introduzione

Lo sviluppo di xenotrapianti derivati da pazienti tumorali (PDXs), in cui i campioni di tumore chirurgicamente asportati vengono innestati direttamente in topi immuno-compromessi, offre diversi vantaggi rispetto ai modelli di xenotrapianto di cellule-linea standard e rappresenta un importante passo avanti nella ricerca sul cancro ^1,2. PDXs possono essere mantenuti e ampliati con passaggi successivi con minima alterazione delle caratteristiche genetiche e biologiche del tumore coltivate nel primo passaggio; e riflettere più accuratamente l'eterogeneità del tumore di xenotrapianti derivate da linee cellulari tumorali umane ^3-8. Questi modelli ....