Proponiamo un protocollo per identificare gli acidi grassi senza la necessità di purificarli. Combina le informazioni sui tempi di ritenzione con gli spettri di massa di tre tipi di derivati degli acidi grassi: esteri metilici degli acidi grassi (FAME), derivati della 4,4-dimetilossazolina (DMOX) e esteri 3-piridilcarbinil (picolinil).
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Articolo metodologico
Identificazione di acidi grassi a
In questo articolo
Sommario
Abstract
Le specie Bacillus contengono ramificata catena e acidi grassi insaturi (FAS) con diverse posizioni del ramo di metile (ISO o anteiso) e del doppio legame. Cambiamenti nella composizione FA giocano un ruolo cruciale nell'adattamento dei batteri al loro ambiente. Queste modifiche comportano una variazione del rapporto di iso rispetto anteiso ramificato AF, e nella proporzione di insaturo FAs rispetto al satura AF, con doppi legami creati in posizioni specifiche. Identificazione precisa del profilo di FA è necessario comprendere i meccanismi di adattamento di specie Bacillus.
Molte delle federazioni da Bacillus non sono disponibili in commercio. La strategia proposta nel presente documento identifica FAs combinando le informazioni sul tempo di ritenzione (calcolo della lunghezza della catena equivalente (ECL)), con gli spettri di massa di tre tipi di derivati FA: gli esteri metilici degli acidi grassi (FAME), 4,4-dimetil ossazolinici derivati (DMOX), e3-pyridylcarbinyl estere (picolinyl). Questo metodo può identificare FAS senza la necessità di purificare l'ignoto AF.
Confrontando i profili cromatografici di FAME preparato da Bacillus cereus con una miscela commerciale di standard consente l'identificazione di catena lineare saturo AF, il calcolo della ECL, e ipotesi sull'identità dell'altro AF. FAMEs di ramificata saturi Federcalcio, iso o anteiso, visualizzare un cambiamento negativo costante nella ECL, rispetto alla FAS lineari saturi con lo stesso numero di atomi di carbonio. FAMEs di insaturo AF possono essere rilevati dalla massa dei loro ioni molecolari, e determinano uno spostamento positivo nella ECL rispetto ai corrispondenti federazioni saturi.
La posizione ramificazione del FAS e la posizione del doppio legame insaturi FAs possono essere identificati dagli spettri di massa a ionizzazione di elettroni picolinyl e DMOX derivati, rispettivamente. Questo approccio identifica tutto il ramo saturo sconosciutaEd FAs, insaturi a catena lineare FAs e AF ramificati insaturi dall'estratto cereus B..
Introduzione
Acidi grassi gascromatografia estere metilico (FAME) (GC) è un metodo essenziale per la caratterizzazione dei lipidi. Si separa rapidamente e quantifica i vari acidi grassi (FAS) di un campione dopo una breve fase di estrazione. Derivati di esteri metilici sono altamente volatili, stabile ed inerte verso la colonna cromatografica, evitando così i picchi di decantazione. La loro identificazione è piuttosto semplice quando il campione è costituito da FAs ben noti in quanto i profili cromatografici o sono pubblicati o rispetto agli standard. Inoltre, l'iniezione ripetuta di standard di calibrazione per la quantificazione di vari FAs non è necessario, data la loro ....
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Protocollo
1. colture batteriche
- Preparare un prato di batteri (Bacillus cereus ceppo ATCC 14579) diffondendo 100 ml di una coltura durante la notte del ceppo incubato a 30 ° C in LB (Luria-Bertani medio), sulla superficie di una piastra di terreno LB agar. Incubare la piastra per una notte a 30 ° C.
2. ECL: lunghezza della catena Equivalente
- Calcolare ECL come segue:
con:
i, il soluto di interesse;
n, il numero di carbonio del rettilineo catena di acido grasso saturo estere metilico eluendo prima so....
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Risultati
La strategia di identificazione FA da cellule batteriche è presentato in Figura 1. Ogni passo fornisce informazioni spettrali complementari o informazioni su di ritenzione cromatografica. Fase 1 consiste preliminare identificazione FA utilizzando una soluzione standard. Step 2 permette l'interpretazione di FAME EI spettri e la loro ECL, al fine di tentare di identificare i prodotti. Fase 3 identifica la posizione esatta ramificazione nella catena ramificata-FAS. Infi.......
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Discussione
I profili cromatogramma AF indicati nella tabella 1 corrispondono a B. cereus ATCC 14579 cresciuta su una superficie della piastra di agar. Profili simili sono stati ottenuti quando il batterio è stato coltivato in terreni liquidi aerato alla stessa temperatura 8. Nel caso dei batteri coltivati in terreno liquido, la biomassa batterica viene raccolto per centrifugazione del mezzo di crescita e può essere lavato secondo protocolli precedentemente descritti a seconda delle condizioni d.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.
Ringraziamenti
Gli autori sono grati a Thomas Mison per il suo supporto tecnico, e di Rachel Kopec per la revisione del manoscritto.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| GC/MS | Shimadzu | QP2010 | |
| ZB WAX | Phenomenex | 7HG-G007-11 | 30 m x 0,25 mm x 0,25 µ m |
| Metanolo Lichrosolv | VWR | 1.06018.2500 | |
| idrossido di potassio | Aldrich | P1767 | |
| THF | Hipersolv Chromanorm | 28559.320 | |
| Diclorometano | Hipersolv Chromanorm | 23373.320 | |
| Esano | Hipersolv Chromanorm | 24575.320 | |
| 3-piridinametanolo | Aldrich | P6-680-7 | |
| tertiobutossido di potassio | Aldrich | 156671 | |
| 2-ammino-2-metil-1-propanolo | A-9879 | ||
| MilliQ Academic Millipore | ZMQS50001 | ||
| estere metilico acido batterico (BAME) | Sigma-Aldrich | 47080-U Supelco |
Riferimenti
- Christie, W. W., Han, X. Lipid Analysis 4th Edition. , Oily press. (2010).
- HÜbschmann, H. -J. Handbook of GC-MS: fundamental and application. Third edition. , Wiley-vch. (2015).
- Sasser, M.
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Ristampe e permessi
Tag
Identificazione degli acidi grassiGascromatografia spettrometria di massaEsteri metilici degli acidi grassiLunghezza equivalente della catenaDerivati della 44 dimetilossolazinaEstere 3 piridilcarbinilicoAcidi grassi a catena ramificataAcidi grassi insaturiPosizione della ramificazione metilicaPosizione del doppio legame
