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Articolo metodologico

Il modello del coniglio di aterosclerosi accelerata: una prospettiva metodologica della ferita dell'aerostato dell'arteria iliaca

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DOI:

10.3791/55295

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3 ottobre 2017

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* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Modelli animali di aterosclerosi sono essenziali per capire il meccanismo e per indagare più recenti approcci per prevenire lo sviluppo della placca o rottura, delle cause principali di morte nel mondo industrializzato. Questo protocollo utilizza una combinazione di lesioni palloncino e dieta ricca di colesterolo per indurre placche aterosclerotiche nell'arteria iliaca coniglio.

Abstract

Sindrome coronarica acuta derivando dall'occlusione coronaria dopo la rottura e lo sviluppo della placca aterosclerotica è la principale causa di morte nel mondo industrializzato. Conigli di bianco di Nuova Zelanda (NZW) sono ampiamente usati come modello animale per lo studio dell'aterosclerosi. Si sviluppano lesioni spontanee quando alimentati con dieta atherogenic; Tuttavia, questo richiede molto tempo di 4-8 mesi. Per ulteriormente migliorare e accelerare l'aterogenesi, una combinazione di dieta atherogenic e lesione endoteliale meccanica è spesso impiegata. La procedura presentata per indurre le placche aterosclerotiche in conigli utilizza un catetere a palloncino di perturbare l'endotelio nell'arteria iliaca sinistra di NZW conigli alimentati con dieta atherogenic. Tali danni meccanici causati dal catetere a palloncino induce una catena di reazioni infiammatorie neointimale accumulo di lipidi in un modo dipendente dal tempo di avvio. La placca aterosclerotica seguendo palloncino lesioni Visualizza neointimale l'ispessimento con infiltrazione lipidica vasto, contenuto della cella di muscolo liscio alta e presenza di macrofagi derivati cellule della gomma piuma. Questa tecnica è semplice, riproducibile e produce placca di lunghezza controllata all'interno dell'arteria iliaca. Tutta la procedura è completata entro 20-30 min. La procedura è sicura con bassa mortalità e offre anche elevato successo nell'ottenere notevoli lesioni intimale. La procedura del catetere a palloncino indotto risultati di lesione arteriosa nell'aterosclerosi entro due settimane. Questo modello può essere utilizzato per indagare la patologia di malattia, diagnostica per immagini e valutare nuove strategie terapeutiche.

Introduzione

La rottura delle placche aterosclerotiche vulnerabili è una delle principali cause di morte nei paesi industrializzati1. Anche se la ricerca negli ultimi decenni ha spiegato diversi meccanismi cellulari e molecolari coinvolti nella progressione della placca, ha continuato gli sforzi sono ancora necessari non solo per svelare il complesso meccanismo della progressione di malattia ma anche per sperimentare nuove terapeutico si avvicina. Sono stati proposti diversi modelli animali per studiare l'aterosclerosi. Manipolazione genetica, lesioni di endotelio di alimentazione o meccanico di colesterolo sono le strategie standard condivise da modelli pi....

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Protocollo

questo protocollo sperimentale è stato approvato dal ufficio del veterinario cantonale, Friburgo e la Swiss federale veterinaria ufficio, Svizzera (FR 2015/58).

Nota: conigli di NZW maschio da 2,8 a 3,2 kg sono stati utilizzati. Gli animali sono stati alloggiati in condizioni convenzionali (12 h luce e ciclo scuro, fornito cibo e acqua ad libitum). Prima decumulazione palloncino, gli animali sono stati acclimatati per 1 settimana durante la quale sono stati alimentati con dieta normale. Dopo 1 settimana di acclimatazione, conigli sono stati commutati a dieta atherogenic che consiste di alto contenuto di grassi (8,6%) e acidi grassi saturi....

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Risultati

Lesioni dell'aerostato dell'arteria iliaca è stata effettuata con successo senza complicazione (Figura 1). Il tempo operatorio totale variato da 20 a 30 min per lesioni eseguite su soltanto un'arteria iliaca e 35 a 45 min per lesioni su entrambe le arterie. Il coniglio ha recuperato entro 1 h dopo la ferita di palloncino. Tutti gli animali è apparso sani senza perdita di peso significativa. È stata rilevata alcuna infezione, edema o trombosi arteriosa. Dell'a.......

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Discussione

Il modello di aterosclerosi dell'arteria iliaca di coniglio è ampiamente usato nella ricerca di aterosclerosi. Con questo protocollo i conigli sviluppato rapidamente placche più gravi e avanzate rispetto alle lesioni spontanee sviluppate con solo dieta ricca in colesterolo. D'importanza, gli animali recuperano rapidamente dalla chirurgia.

Lo stimolo principale per atherogenesis è i danni meccanici causati dal catetere a palloncino che danneggia l'endotelio e si distende il vaso muro

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Dichiarazioni

Gli autori non dichiarano concorrenti interessi finanziari.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato supportato dalla Swiss National Science Foundation Grant 150271.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Nuova Zelanda Conigli bianchi CharlesRiver laboratories, FranciaCre:KBL (NZW)
dieta ricca di colesteroloSsniff spezialdiä tenSsniff EF K Sterilizzatore di microsfere di vetro ad alto contenuto di grassi e colesterolo
500VWR, Leicestershire, Regno Unito101326-488
Cateteri per embolectomia a palloncino Fogarty, 2 francesiEdwards Lifesciences, Svizzera120602FSolo per uso singolo
Siringa Luer LockBecton, Dickinson and Company, USA309628
Thermopad Tipo 226Solis, Svizzera AG397387
Buprenorfina- TemgesicReckitt Benckiser AG, Svizzera7.68042E+12
IsofluranePiramal Critical Care, Inc, Bethlehem, PA 180172667-46-7
Macchina per anestesia-combi-vet Sistema di anestesia di baseRothacher Medical GmbH, SvizzeraCV 30-301-A
Monitor veterinario dei segni vitali Cardell touchMidmark, Ohio, USA8013-001
Unguento oftalmico-HumigelVirbac, Francia
Tagliacapelli per animaliAesculap AG, GermaniaGT420
Soluzione disinfettante-BetadineMundipharmaMedicalCompany, Svizzera14671-1203
Dumont #7 PinzeFST Germania11274-20
Medio e piccolo microforbiciMedline International Svizzera Sà rlUC4337
Morsetti microvascolariFST, Germania18051-28
PapaverinaESCA prodotti chimici, SvizzeraRE 356 803
Vein PickHarvard Apparatus, Cambridge, Regno Unito72-4169Solo per uso singolo
SalineLaboratorium Dr. G. Bichsel AG, , Svizzera1330055
SuturaPolysorb 5-0Covidien AG, SvizzeraUL 202Monofilamento
sulfadossina e trimetoprim-trimetazoloWerner Stricker AG, SvizzeraSwissmedic Nr. 50'361
Antisettico- OcteniseptSchü lke & Mayr AG, SvizzeraGTIN: Soluzione salina tamponata con fosfato 4032651214068
Roth1058.1
Isobutanol-2-MetilbutanoSigma-Aldrich, SvizzeraM32631-1L
Temperatura di taglio ottimale composto-Tessuto-TekVWR Chemicals, Belgio25608-930
CriostatoLeica, Glattbrugg, SvizzeraLeica CM1860 UV
Vetrino - Superfrost PlusThermo Scientific4951PLUS4
Ematossilina di MayerSigma-Aldrich, SvizzeraMHS32-1L
Eosina 0,5% aq.Sigma-Aldrich, SvizzeraHT110232-1L
Olio Rosso OSigma-Aldrich, SvizzeraO0625-25G
&alfa;-muscolo liscio anticorpo actinaAbcam, Regno Unito.ab7817
Clone di macrofagi Anticorpo RAM11DAKO, SvizzeraM063301
HoechstAbcam, Regno Unito.ab145596
Anticorpo secondario policlonale di capra (Chromeo 546)Abcam, Regno Unito.ab60316
Alexa Fluor 488/547Abcam, Regno Unito.
Mezzo di montaggio in glicegel, acquosoDAKO, SvizzeraC056330
ematossilina per colorazione pentacromica MovatSigma-Aldrich, SvizzeraH3136-25G
Cloruro ferrico per colorazione pentacromica MovatSigma-Aldrich, Svizzera157740-100G
Iodio per colorazione MovatSigma-Aldrich, Svizzera207772-100G
Ioduro di potassio per colorazione pentacromica MovatSigma-Aldrich, Svizzera60400-100G-F
Blu alciano per colorazione MovatSigma-Aldrich, SvizzeraA5268-10G
Ammoniaca forte per colorazione pentacromica MovatSigma-Aldrich, Svizzera320145-500ML
Crocein brillante MOO per colorazione pentacromica MovatSigma-Aldrich, Svizzera210757-50G
Acido Fucsin per colorazione pentacromica MovatSigma-Aldrich, SvizzeraF8129-50G
Tiosolfato di sodio per colorazione pentacromica MovatSigma-Aldrich, Svizzera72049-250G
Acido fosfotungstico per colorazione pentacromica MovatSigma-Aldrich, Svizzera79690-100G
Crocina per pentacromia Movat colorazioneSigma-Aldrich, Svizzera17304-5G
EUKITT per colorazione pentacromica MovatSigma-Aldrich, Svizzera03989-100ML

Riferimenti

  1. Mozaffarian, D., et al. Heart disease and stroke statistics--2015 update: a report from the American Heart Association. Circulation. 131, e29-e322 (2015).
  2. Boone, L. R., Brooks, P. A., Niesen, M. I., Ness, G. C. Mechanism of resistance to dietary cholesterol. J Li....

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