L'emorragia non controllata, una causa importante della mortalità tra i pazienti traumatici, può essere modellata utilizzando una lacerazione epatica standard in un modello murino. Questo modello provoca una consistente perdita di sangue, la sopravvivenza e consente di testare agenti emostatici. Questo articolo fornisce il processo passo per passo per eseguire questo prezioso modello.
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Articolo metodologico
Scossa emorragica non controllata modellata mediante Lacerazione del fegato nei topi con monitoraggio emodinamico in tempo reale
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'emorragia non controllata è una causa importante delle morti evitabili tra i pazienti traumatici. Abbiamo sviluppato un modello murino di emorragia incontrollata attraverso una lacerazione epatica che comporta una consistente perdita di sangue, alterazioni emodinamiche e sopravvivenza.
I topi subiscono una resezione standardizzata del lobo sinistro e medio del fegato. Sono autorizzati a sanguinare senza intervento meccanico. Gli agenti emostatici possono essere somministrati come terapia di pre-trattamento o di soccorso a seconda dell'interesse dell'investigatore. Durante l'emorragia, viene eseguito il monitoraggio emodinamico in tempo reale attraverso una linea arteriosa sinistra femorale. I topi vengono poi sacrificati, la perdita di sangue viene quantificata, il sangue viene raccolto per ulteriori analisi e gli organi vengono raccolti per l'analisi del danno. È descritto il disegno sperimentale per consentire la sperimentazione simultanea di più animali.
L'emorragia epatica come modello di emorragia incontrollata esisteN la letteratura, principalmente nei modelli ratto e porcino. Alcuni di questi modelli utilizzano il monitoraggio emodinamico o quantificano la perdita di sangue ma mancano la coerenza. Il presente modello comprende la quantificazione della perdita di sangue, il monitoraggio emodinamico in tempo reale in un modello murino che offre il vantaggio di utilizzare linee transgeniche e un meccanismo ad alto rendimento per studiare ulteriormente i meccanismi patofisiologici in emorragia incontrollata.
Introduzione
Il trauma è la principale causa di morte e disabilità tra i giovani in tutto il mondo. 1 L' emorragia non controllata rimane una causa principale di mortalità tra i pazienti con traumi gravemente feriti. 2 La gestione del paziente traumatico emorragico è duplice: il controllo del sanguinamento chirurgico, la rianimazione e la sostituzione del sangue perduto.
I modelli animali di shock emorragico sono stati la pietra angolare nella ricerca del trauma e possono essere utilizzati nella valutazione della fisiopatologia e del trattamento dello shock traumatico / emorragico. ....
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Protocollo
I topi sono stati ospitati in conformità con le norme di cura degli animali in condizioni specifiche per la cura degli animali, con 12 ore di ciclo chiaro e scuro, e accesso libero a tutti i pazienti, in conformità con l'Università di Pittsburgh (Pittsburgh, PA) e National Institutes of Health (NIH; Bethesda, MD). L'alimentazione standard e l'acqua. Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati approvati e condotti secondo le linee guida stabilite dal comitato di ricerca e cura degli animali presso l'Università di Pittsburgh.
1. Installazione del campo chirurgico e dello strumento
- Sterilizzare tutti gli....
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Risultati
Il modello di lacerazione del fegato produce una perdita di sangue riproducibile e coerente nei topi. La figura 1A mostra il peso coerente del fegato lacerato che può essere ottenuto con una deviazione standard di soli 0,02 g. Questa coerenza nel peso fegato lacerato consente la capacità di riprodurre il modello tra i topi e in differenti configurazioni sperimentali come diversi protocolli resuscitativi. Inoltre, il peso riproducibile del fegato lacerato, con un errore s.......
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Discussione
Il modello di lacerazione del fegato murino qui descritto fornisce un modello affidabile e coerente di emorragia incontrollata. Questo modello è semplice da eseguire ma ci sono importanti passaggi che richiedono una considerazione meticolosa. La parte più tecnicamente impegnativa del modello è la cannulazione dei vasi femorali per il monitoraggio emodinamico e la somministrazione di fluido / farmaco. La cura deve essere presa durante la dissezione del nervo e dell'arteriotomia / venotomia. È importante non toccare i.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno interessi concorrenti finanziari da dichiarare.
Ringraziamenti
Il lavoro di questo manoscritto è stato sostenuto da finanziamenti al dottor Neal del Programma Pilot Project dell'Istituto di Medicina Vascolare in emostasi e biologia vascolare (P3HVB) e della borsa di ricerca AAST. Questo lavoro è supportato da US National Institutes of Health grante 1 R35 GM119526-01 e UM1HL120877-01.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| SS/45 dumonts | Fine Science Tools | 11203-25 | |
| forbici chirurgiche | Fine Science Tools | 14068-12 | |
| emostatici | Fine Science Tools | 13009-12 | |
| microforbici | Fine Science Tools | 15000-08 | |
| 0,8 mm pinza curva | Fine Science Tools | 11009-13 | |
| bobina di sutura 6-0 | Fine Science Tools | 18020-60 | |
| sutura 4-0 seta con ago | Garza Owens Minor | K188H | |
| 4 x 4 | può essere acquistata tramite qualsiasi fornitore | ||
| L'applicatore con punta in cotone | può essere acquistato tramite qualsiasi fornitore | ||
| L'ago da 30 G | può essere acquistato tramite qualsiasi fornitore | ||
| Ago | da 23 Gpuò essere acquistato tramite qualsiasi fornitore | ||
| Siringa da 10 cc | può essere acquistato tramite qualsiasi fornitore | ||
| tubo conico da 50 cc | può essere acquistato tramite qualsiasi fornitore | ||
| Siringa da 1 cc con ago da 25G | Fisher Scientific | 14-826-88 | |
| Tubo in polietilene 10 100' (PE-10) | Fisher Scientific | 14-170-12P | |
| Tubo in polietilene 50 100'(PE-50) | Fisher Scientific | 14-170-12B | |
| Rubinetto a 3 vie | Fisher Scientific | NC9779127 | |
| cuscinetto chirurgico blu | Fisher Scientific | 50-7105 | |
| Medicazioni sterili Fisher | Scientific | NC9517505 | |
| nastro adesivo 1" | Corporate Express | MMM26001 | |
| barattoli a bocca larga lato dritto | VWR | 159000-058 | |
| vassoio in acciaio inox 8" x 11" | VWR | 62687-049 | |
| leur lock maschio-maschio a 3 vie | VWR | 20068-909 | |
| busta di sterilizzazione 3" x 8" | VWR | 24008 | |
| busta di sterilizzazione 5" x 10" | VWR | 24010 | |
| triangoli di assorbimento | Fine Science Tools | 18105-03 | |
| Applicatore di clip per ferite da 7 mm | Fisher Scientific | E0522687 | |
| 1.000 clip per ferite da 7 mm | Fisher Scientific | E0522687 | |
| betadine (4 oz) | può essere acquistato tramite qualsiasi fornitore | ||
| guanti sterili | possono essere acquistati tramite qualsiasi fornitore | ||
| eppendorfs | può essere acquistato tramite qualsiasi fornitore | ||
| Siringa da insulina Lo-Dose da 1/2 cc | Fisher Scientific | 12-826-79 | |
| piccola pesa può | essere acquistata tramite qualsiasi fornitore | ||
| ringer lattati | possono essere acquistati tramite qualsiasi fornitore | ||
| Soluzione salina epranizzata (.1 µL; hep + 9,9 µL; NaCl) | può essere acquistato tramite qualsiasi fornitore | ||
| di soluzione salina tamponata con fosfato. | Può essere acquistato tramite qualsiasi fornitore | ||
| Pentobarbital | può essere acquistato tramite qualsiasi fornitore | ||
| Microscopio Wild M650 con supporto a braccio | Analizzatore e | ||
| Digi-Med BPA-400 | Micro-Med | SYS-400 | |
| TXD-310 (trasduttore Digi-Med) | Micro-Med | TXD-300 | |
| Computer | Dell | ||
| sterilizzatore per strumenti a microsfere | VWR | 11156-002 | |
| Oster A5 clipper con lama 40 lame | VWR | 10749-020 | |
| termoforo circolante 18 x 26 | Harvard | py872-5272 | |
| termometro rettale | Kent Scientific | RET-3 |
Riferimenti
- Chang, R., Cardenas, J. C., Wade, C. E., Holcomb, J. B. Advances in the understanding of trauma-induced coagulopathy. Blood. 128 (8), 1043-1049 (2016).
- Kutcher, M. E., et al. A paradigm shift in trauma resuscitation: evaluation of evolving massive transfusion practices. JAMA surgery. 148 (9), 834-840 (2013).
- Tsukamoto,....
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Ristampe e permessi
