Qui descriviamo un metodo comune per indurre la lesione cronica del fegato nei topi di alimentazione di una dieta di colina-carenti ed etionina-completati (CDE). Dimostriamo che la sorveglianza sanitaria, aspersione epatica, isolamento e conservazione. Un corso di sei settimane di tempo può informare circa il disturbo al fegato, pathohistology, fibrosi, infiammatoria e risposte delle cellule progenitrici del fegato.
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Articolo metodologico
La murino colina-carenti, etionina-completati (CDE) dieta modello della lesione epatica cronica
In questo articolo
Sommario
Abstract
Malattie croniche del fegato, come epatite virale, malattie epatiche alcoliche o analcoliche steatosi epatica, sono caratterizzate da infiammazione continua, progressiva distruzione e rigenerazione della cellula progenitore parenchima epatico, fegato proliferazione e fibrosi. Lo stadio terminale di ogni malattia cronica del fegato è la cirrosi, un fattore di rischio importante per lo sviluppo di carcinoma epatocellulare. Per studiare i processi che regolano la progressione, istituzione e l'inizio di malattia, parecchi modelli animali sono utilizzati nei laboratori. Qui descriviamo un corso di sei settimane di tempo di colina-carenti ed etionina-completati (CDE) modello del topo, che coinvolge sei - settimana-vecchio topo C57BL/6J maschio di alimentazione con colina-carente chow e 0,15% DL-etionina-completati di acqua potabile. Monitoraggio della salute degli animali e una curva di perdita di peso corpo tipici sono spiegati. Il protocollo dimostra l'esame lordo di una collezione di fegato e del sangue di CDE-trattati dalla puntura cardiaca per le analisi successive del siero. Successivamente, la tecnica di aspersione del fegato e la raccolta di diversi lobi epatici per valutazioni standard sono indicati, tra cui l'istologia del fegato valutazioni di ematossilina ed eosina o Sirius Red stainings, immunofluorescente rilevamento delle popolazioni delle cellule epatiche così come transcriptome analisi del microambiente del fegato. Questo modello di mouse è adatto per studiare infiammatoria, fibrogenici e cellula del progenitor del fegato dinamica indotta attraverso l'affezione epatica cronica e può essere utilizzato per verificare potenziali agenti terapeutici che possono modulare questi processi.
Introduzione
Il fegato è il più grande organo ghiandolare metabolico del corpo ed ha molte funzioni complesse. Ruoli chiave per il fegato includono la digestione, metabolismo, disintossicazione, deposito di nutrienti essenziali, produzione di componenti proteiche del plasma sanguigno e immunità mediata attraverso residenti macrofagi o cellule di Kupffer. Il fegato ha una grande capacità di rigenerare anche se fino al 70-90% della sua massa totale è perduto. In caso di lesioni epatiche acute, come visto in seguito epatectomia parziale o avvelenamento dell'acetaminofene, gli epatociti sani rimanenti proliferano per riparare il danno in un processo altamente coordinata
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Protocollo
1. sperimentazione animale
tutti gli studi sugli animali descritti in questa indagine sono stati approvati dal comitato di etica animale Università di Curtin (numero di omologazione: AEC_2014_28) prima dell'inizio della esperimenti ed eseguiti in conformità con il codice australiano per la cura e l'uso di animali.
- Animali
- utilizzare topo C57BL/6J maschio vecchio di sei settimane per gli esperimenti.
- Disegno sperimentale
- seguito arrivo presso l'impianto di animale, consentire topi acclimatare per quattro giorni prima dell'inizio di qualsiasi esperimenti. ....
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Risultati
Durante tutto il corso di tempo di sei settimane di lesione epatica cronica indotta da CDE, i parametri sono stati valutati nei giorni 7 (fase di induzione), 14 e 21 (fase di costituzione) e 42 (fase di mantenimento). Rispetto ai topi controllo, topi trattati CDE perso fino al 20% del loro peso corporeo iniziale in una fase di adattamento iniziale e tendono a riacquistare peso nelle fasi di creazione e manutenzione (Figura 1). Il peso corpore.......
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Discussione
L'affezione epatica cronica è spesso una malattia silenziosa con maggior parte dei pazienti sono asintomatici ed è uno dei maggiori contributori alla morbilità e mortalità in tutto il mondo. L'alcolismo cronico e l'infezione del virus dell'epatite C sono le principali cause. Lesione epatica cronica è caratterizzata da infiammazione epatica, fibrosi e nei casi più gravi cirrosi, carcinoma e insufficienza epatica in definitiva. Non esiste attualmente una cura disponibile e anche se sono stati compiuti progressi importanti .......
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Dichiarazioni
Non c'è nulla per essere comunicati dagli autori.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni dal National Health and Medical Research Consiglio (NHMRC) dell'Australia (APP1042370, APP1061332, APP1087125). Gli autori vorrei ringraziare il personale di Curtin Health Innovation Research Institute per l'assistenza tecnica.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Topi maschi C57BL/6J di sei settimane | Centro risorse animali dell'Australia occidentale, Murdoch, WA, Australia | N/A | |
| 10 Kg Taglio a Vapore Wheaten Chaff | Mangimi speciali, Glen Forrest, WA, Australia | N/A Acqua | |
| per irrigazione Flacone da 1000ml (Baxter) | Casa chirurgica, Perth, WA, Australia | ||
| Dieta carente di colina, modificata (pellet) | MP Biomedicals Australasia Pty Limited, WA, Australia 02960210 | ||
| DL-Ethionine | Sigma-Aldrich, Castle Hill, Nuovo Galles del Sud, Australia | E5139-25G | |
| Iniezione di Ketamil | Troy Laboratories Pty Limited, Glendenning, Nuovo Galles del Sud, Australia | N / A | |
| Ilum Xylazil-20 iniezione | Troy Laboratories Pty Limited, Glendenning, Nuovo Galles del Sud, Australia | N/A | |
| 27G x 1/2", ago da parete regolare | Terumo Australia Pty Limited, Nuovo Galles del Sud, Australia | NN-2713R | |
| Siringhe Terumo 1ml e 10ml | Terumo Australia Pty Limited, Macquarie Park, Nuovo Galles del Sud, Australia | 1018242, 1018037 | |
| composto OCT Tissue-Tek | VWR International Pty Limited, Tingalpa, QLD, Australia | 25608-930 | |
| Formalina tamponata neutra | Amber Scientific, Midvale, WA, Australia | NBF-2.5L | |
| Etanolo assoluto anaLaR normalpur | VWR International Pty Limited, Tingalpa, QLD, Australia | 20821.33 | |
| Vetrini Superfrost Plus | Grale Scientific Pty Limited, Ringwood, VIC, Australia | ||
| Blocco proteico Dako, senza siero | Dako Australia Pty Limited, North Sydney, Nuovo Galles del Sud, Australia | X090930-2 | |
| Diluente anticorpale Dako | Dako Australia Pty Limited, North Sydney, Nuovo Galles del Sud, Australia | s0809 | |
| ratto anti-CD45 | eBioscience, San Diego, California, Stati Uniti d'America. | m0701 | 1/200 di diluizione |
| anti-padella per conigliCK | Dako Australia Pty Limited, North Sydney, Nuovo Galles del Sud, Australia | Z0622 | 1/300 diluizione |
| Capra anti-coniglio (Alexa Fluor 488) | Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia | A-11008 | 1/500 diluizione |
| Capra anti-ratto IgG (Alexa Fluor 594) | Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia | A-11007 | Diluizione 1/500 |
| Reagente antidissolvenza ProLong Gold con DAPI | Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia | P36935 | |
| Kit per macchie rosse Picrosirius | Polysciences Inc., Warrington, PA, Stati Uniti | ab150681 |
Riferimenti
- Taub, R. Liver regeneration: from myth to mechanism. Nat Rev Mol Cell Biol. 5, 836-847 (2004).
- Kohn-Gaone, J., Gogoi-Tiwari, J., Ramm, G. A., Olynyk, J. K., Tirnitz-Parker, J. E. The role of liver progenitor cells during liver regeneration....
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Ristampe e permessi
