Qui, ci alleniamo topi su un compito di apprendimento associativo per testare la discriminazione di odore. Questo protocollo consente inoltre di studi sui cambiamenti strutturali indotti su apprendimento nel cervello.
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Articolo metodologico
Una prova oggettiva e riproducibile di apprendimento olfattivo e discriminazione nei topi
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'olfatto è predominante modalità sensoriale in topi e influenza molti comportamenti importanti, tra cui foraggiamento, rilevamento di predator, accoppiamento e genitorialità. D'importanza, topi possono essere addestrati per associare gli odori romanzo con risposte comportamentali specifiche per fornire la comprensione nella funzione olfattiva circuito. Questo protocollo in dettaglio la procedura per topi di formazione su un compito di apprendimento operante passa/non passa. In questo approccio, topi sono addestrati su centinaia di prove automatizzate al giorno per 2 – 4 settimane e possono essere testati su romanzo passa/non passa odore coppie per valutare discriminazione olfattiva, o essere utilizzato per gli studi su come apprendimento odore altera la struttura o la funzione dell'olfattiva circuito. Il bulbo olfattivo del mouse (OB) dispone inoltre di integrazione in atto dei neuroni adulti-Nato. Interessante, apprendimento olfattivo aumenta la sopravvivenza e la connessioni sinaptiche di questi neuroni adulto-Nato. Pertanto, il presente protocollo può essere combinato con altre tecniche biochimiche, elettrofisiologiche e di formazione immagine per studiare i fattori di apprendimento e attività-dipendente che mediano la sopravvivenza neuronale e plasticità.
Introduzione
Il mouse OB, dove informazioni odore entrano per la prima il sistema nervoso centrale (SNC), fornisce un eccellente modello per studiare i cambiamenti strutturali di esperienza-dipendente. I circuiti OB integra continuamente adulto-Nato neuroni in maniera dipendente di attività. Precursori del neurone adulto-Nato dividono fuori da progenitori che costeggiano la zona subventricular adiacente al ventricoli laterali1. Dopo la migrazione in OB, questi precursori neuronali o sopravvivono, differenziano e integrano come cellule del granello inibitorio o subiscono apoptosi2. Selezione per il destino della cellula è influenzata ....
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Protocollo
Tutti i topi sono stati utilizzati nell'ambito di un protocollo approvato dal comitato di uso e Baylor College di medicina istituzionali cura degli animali in conformità con gli standard NIH. Topi usati in questo protocollo sono stati tutti i topi adulti (> 6 settimane di età) su C57BL6/j sfondo e incluso topi sia maschili che femminili. Dopo le attività di formazione/messa in scena, topi vengono restituiti al loro gabbia a casa.
1. costruzione e regole generali per l'utilizzo di Operant apprendimento Box (Figura 1B, C)
- Assemblare una camera del mouse con il pavimento di camera. Tenere la scatola di f....
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Risultati
Una volta che i topi hanno imparato l'attività di apprendimento olfattivo, ora possono associare coppie romanzo odore con ricompensa e la punizione. Questi topi addestrati iniziano normalmente con circa il 50% precisione il compito di passa/non passa. La percentuale corretta possa essere tracciata dal blocco di prova come una curva di apprendimento per coppie romanzo odore (Figura 3A). All'interno di 10 prove di blocco, che prendono la maggio.......
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Discussione
Il sistema olfattivo roditore fornisce un modello unico per studiare la plasticità dipendente sensoriale. Qui presentiamo un paradigma di apprendimento olfattivo per addestrare i topi per associare odorant coppie con una ricompensa o punizione. Attraverso questa attività di apprendimento, cambiamenti di circuito a valle possono essere studiate in esperimenti successivi (elettrofisiologia, in vivo imaging neuronale, ecc.). A completamento, topi imparerà a eseguire un'operazione di semplice odore acciacca.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano senza conflitti di interesse e senza interessi concorrenti.
Ringraziamenti
Questo protocollo è adattato da precedenti lavori all'interno del nostro laboratorio (Huang et al. 8). tutti i metodi descritti qui sono stati approvati dalla cura degli animali e uso Comitato (ACUC) del Baylor College of Medicine. È supportato il McNair Medical Institute, grant NINDS R01NS078294 a B.R.A., grant NIH IDDRC U54HD083092, grant NIDDK F30DK112571 a JMP e di concessione NINDS F31NS092435 a CKM.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Fiala di vetro | Qorpak | GLC-01016 | |
| Tubo in silicone | Thermo Scientific | 86000030 | |
| aghi calibro 18 | BD | 305196 | |
| 1-Butanolo | Sigma Aldrich | 437603 | |
| Acido propionico | Sigma Aldrich | 402907 | |
| Mouse Chamber | Med Associates | ENV-307W | |
| Pavimento della camera | Med Associates | ENV-307W-GFW | |
| Porta dell'acqua | Med Associates | ENV-313W | Necessita di due |
| stimoli olfattivi | Med Associates | ENV-275 | Contiene 2 valvole per l'erogazione degli odori del cancello |
| Odor Port | Med Associates | ENV-375W-NPP | |
| USB Interfaccia USB | Med Associates | DIG-703A-USB | |
| Computer desktop con Windows 2000, XP, Vista o 7 | |||
| Flussometro | VWR | 97004-952 | |
| Software comportamentale | Med Associates | SOF-735 | Questo software, che esegue ogni fase di formazione, è stato ora sostituito con Software di trasferimento dati Med-PC V |
| Med Associates | SOF-731 | Questo software formatta i dati in Excel | |
| Training Software | Med Associates | DIG-703A-USB | Questo software viene utilizzato per programmare ogni fase di formazione |
| Valvola dell'acqua | Neptune Research | 225P012-11 | Questa valvola viene utilizzata per bloccare l'erogazione dell'acqua. Hai bisogno di due |
| valvole per odori | Neptune Research | 360P012-42 | Questa valvola viene utilizzata per bloccare l'erogazione degli odori. Ne servono due |
Riferimenti
- Carleton, A., Petreanu, L. T., Lansford, R., Alvarez-Buylla, A., Lledo, P. M. Becoming a new neuron in the adult olfactory bulb. Nat Neurosci. 6 (5), 507-518 (2003).
- Petreanu, L., Alvarez-Buylla, A. Maturation and death of adult-born olfactory bulb granule neurons: role of olfaction.....
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Ristampe e permessi
