Un anione cambio metodo a base di resine, adattato a liquido basato su urto bioaerosol campionamento dei virus è dimostrato. Quando accoppiato con rilevazione molecolare a valle, il metodo consente facile e sensibile di rilevazione di virus da bioaerosols.
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Articolo metodologico
Rilevamento di virus da Bioaerosols utilizzando resina a scambio anionico
In questo articolo
Sommario
Abstract
Questo protocollo viene illustrato un metodo di campionamento di bioaerosol su misura per i virus. In questo sistema, resina a scambio anionico è accoppiata con dispositivi di prelievo di liquido aria basati su urto efficace concentrazione di virus caricati negativamente da bioaerosols. Così, la resina serve come un passo ulteriore concentrazione del flusso di lavoro di bioaerosol campionamento. Estrazione di acidi nucleici delle particelle virali viene quindi eseguita direttamente dalla resina a scambio ionico, con il campione risultante adatto per analisi molecolari. Inoltre, questo protocollo descrive una camera di bioaerosol su misura in grado di generare carichi di virus bioaerosols sotto una varietà di condizioni ambientali e consentendo per il monitoraggio continuo di variabili ambientali quali temperatura, umidità, velocità del vento e concentrazione di massa di aerosol. Il vantaggio principale dell'utilizzo di questo protocollo è aumento della sensibilità di rilevazione virale, come valutato tramite confronto diretto a un impinger liquido convenzionale non modificato. Altri vantaggi includono la possibilità di concentrare diversi virus caricati negativamente, il basso costo di resina a scambio anionico (~$0.14 per esempio) e la facilità d'uso. Gli svantaggi includono l'impossibilità di questo protocollo per valutare infettività delle particelle virali resina-adsorbito e potenzialmente la necessità per l'ottimizzazione del buffer campionamento liquido utilizzato all'interno del gorgogliatore.
Introduzione
Lo scopo di questo metodo è quello di fornire una piattaforma di campionamento di bioaerosol altamente sensibile per facilitare la rilevazione molecolare del virus caricati negativamente da bioaerosols. Microrganismi, tra cui particelle virali, possono sopravvivere in bioaerosols per lunghi periodi di tempo1. Bioaerosols può viaggiare su distanze relativamente lunghe e mantenere la vitalità e l'infettività, come evidenziato da un focolaio di malattia dei Legionari che ha provenuto da torri si trova ad una distanza di 6 km da individui commoventi di raffreddamento industriale e ha provocato 18 vittime2. Trasmissione indir....
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Protocollo
1. installazione della camera Bioaerosol (Vedi Figura 2)
-
Pre-caricare i liquidi gorgogliatori con 20 mL di 0,01 M tamponato fosfato salino, pH 7.5 (PBS).
- Aggiungere 0,5 g di resina a scambio anionico e sospendere entro il PBS di uno dei gorgogliatori liquidi, con un altro liquido impinger che serve come controllo.
- Gorgogliatori liquidi posizione in parallelo all'interno della camera di bioaerosol utilizzando il morsetto stand con insenature di aerosol nebulizzatore di fronte.
Nota: Vedere la Figura 2 per ulteriori dettagli. - Co-individua....
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Risultati
Figura 1 viene illustrato il principio dietro basati su carica cattura di virus da bioaerosols tramite l'inclusione di resina a base liquida gorgogliatori. La figura 2 Mostra l'installazione della camera bioaerosol su misura. La figura 3 descrive i passaggi necessari a configurare l'esperimento di nebulizzazione e misure per garantire il controllo di qualità. La figura 4.......
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Discussione
Questo protocollo descrive un metodo per cattura sensibile virale da bioaerosols utilizzando modificate liquidi gorgogliatori. Il metodo è ottimizzato per il rilevamento e la quantificazione della carica virale in bioaerosols. La modifica specifica dimostrata qui prevede l'aggiunta di resina a scambio ionico a liquido contenuto all'interno di un comune impinger liquido. Questo metodo è stato sviluppato per la sua semplicità nel trattamento dei campioni a valle, mentre altre tecniche di elaborazione del campione come cent.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto da finanziamenti dal CDC/NIOSH High Plains Intermountain centro agricolo di salute e sicurezza (5U54OH008085) e il Colorado Bioscience Discovery valutazione Grant Program (14BGF-16).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Escherichia coli batteriofago MS2 (ATCC 15597-B1) | Collezione di colture di tipo americano | ATCC 15597-B1 | |
| FluMist AstraZeneca quadrivalente | Contatta | produttore | I componenti virali di questo vaccino sono soggetti a modifiche su base annua |
| CFX96 Touch Sistema di rilevamento PCR in tempo reale | Bio-Rad | 1855195 | |
| Primer e sonde | Tecnologie DNA integrate | NA | |
| 0.2 µ M filtro sterile | NA | NA 1 | |
| L flaconi in pyrex o equivalente | NA | NA 1 | |
| mL puntali per pipetta | NA | NA 1 | |
| mL pipettatore | NA | NA | |
| 50 mL pipetta sierologica | NA | NA | |
| PROVETTE PER PCR | NA NA | Pipet-aid | |
| o equivalente | NA | NA | |
| Mini kit per RNA virale | QIAamp Kit RT-PCR per | 52904 | |
| Qiagen | 204443 | ||
| Amberlite IRA-900 forma cloruro | Sigma-Aldrich | 216585-500G | |
| Soluzione salina tamponata con fosfato | Sigma-Aldrich | P5368-10PAK | |
| Acqua (grado di biologia molecolare) | Sigma-Aldrich | W4502-1L | |
| Provette per microcentrifuga Eppendorf DNA LoBind | ThermoFisher | 13-698-791 | |
| Provette per centrifuga coniche Falcon 50 mL | ThermoFisher | 14-432-22 | |
| Falcon Provette per centrifuga in polipropilene | ThermoFisher | 05-538-62 | |
| SuperScript III Platinum One-Step qRT-PCR Kit con ROX | ThermoFisher | 11745100 | |
| SKC Biocampionatore 20 mL, set di 3 bicchieri | SKC Inc. | 225-9593 | |
| Pompe per campioni Vac-u-Go | SKC Inc. | 228-9695 | |
| Nebulizzatore Collison (6 getti) | BGI Inc. | ||
| Capsula HEPA | PALL | 12144 | |
| Q-TRAK Monitor della qualità dell'aria interna 8554 | TSI Inc. | ||
| Alnor velometro anemometro termico AVM440-A | TSI Inc. | ||
| SidePak AM510 monitor personale per aerosol | TSI Inc. | ||
| Camera per bioaerosol | NA | NA |
Riferimenti
- Pirtle, E. C., Beran, G. W. Virus survival in the environment. Revue scientifique et technique (International Office of Epizootics). 10 (3), 733-748 (1991).
- Nguyen, T. M., et al. A community-wide outbreak of legionnaires disease linked to industrial cooling towers--how far can contaminated aerosols spre....
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Ristampe e permessi
