L'integrina di3 α βvè un tipo di proteina di adesione che è altamente espresso sulle cellule endoteliali attivate che subiscono l'angiogenesi. Quindi, valutando l'integrità dell'integrina è di grande interesse in oncologia. Qui, presentiamo un metodo per preparare 68Ga-etichetta radiopeptides e un metodo per valutarne l'efficacia biologica.
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Articolo metodologico
Preparare un 68Ga-etichettato arginina glicina aspartato (RGD)-peptide per l'angiogenesi
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'integrina di3 α βvè una molecola di adesione heterodimeric coinvolti nell'angiogenesi e migrazione delle cellule tumorali. L'integrina è overexpressed in cellule endoteliali angiogenici tumorali, dove in genere ha una bassa concentrazione. Questa espressione specifica di αvβ3 lo rende un valido biomarcatore per antiangiogenico e imaging droga. Come una modalità di imaging funzionale, tomografia a emissione di positroni (PET) fornisce informazioni su biochimici e fisiologici cambiano in vivo, dovuto la relativa sensibilità alta unico alla scala nanomolari. Quindi, basati su radiometal radiofarmaci PET hanno ricevuto grande attenzione per la quantificazione non invasiva dell'angiogenesi del tumore. Questo documento fornisce un protocollo sistemico per preparare un nuovo peptide radiometal-etichettati per la valutazione dell'angiogenesi. Questo protocollo contiene informazioni sull'affidabilità radiochimica, liposolubilità, uptake cellulare, stabilità del siero e proprietà farmacocinetiche. Il 68Ga-RGD-peptide è uno dei ligandi PET rappresentante verso αvβ3 integrina. Qui, presentiamo un protocollo per preparare un 68Ga-RGD-peptide e la valutazione della sua efficacia biologica.
Introduzione
L'angiogenesi è un processo biologico che è caratterizzato dallo sviluppo di nuovi vasi sanguigni. Tra i molti fattori angiogenetici, αvβ3 integrina è associato con l'invasività, perché l'integrina è altamente espresso nei vasi sanguigni del tumore angiogenica ma è assente nel tessuto normale1.
Peptidi radioattivi di grippaggio del ricevitore con il dominio di aspartato (RGD) arginina glicina, che ha un'alta affinità nei confronti dei recettori con integrina αv3 β, sono considerati promettente angiogenesi imaging agenti2,
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Protocollo
Tutti gli esperimenti sugli animali sono state condotte in conformità con le linee guida per la cura e l'uso di ricerca animali sotto protocolli approvati dalla Korea Institute di radiologica e Comitato di studi degli animali scienze mediche. Tutti i reagenti e solventi sono stati acquistati e utilizzati senza ulteriore purificazione. NOTA-RGD-peptidi sono stati redatti secondo letteratura metodi15.
Attenzione: 68Ga emette raggi gamma e positroni. Tutti gli esperimenti, compreso il contatto diretto o indiretto con sostanze radioattive, devono essere effettuati da addestrati e consentito solo al personale. ....
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Risultati
La chelazione di 68GaCl3 con NOTA-RGD-peptide è stato semplice, e la resa radiolabeling era 99%. Impurità di reazione sono stati rimossi con successo come mostrato nella Figura 2. La purezza radiochimica di 68Ga-RGD-peptide era supera al 99%, e specifiche attività alla fine della sintesi era 90-130 MBq/nmol (Figura 3).
L'uptake cellulare.......
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Discussione
Nello studio presente, abbiamo introdotto un protocollo per preparare un radiopeptide αvβ3 integrina e sua valutazione biologica di targeting. Lo sviluppo di farmaci tradizionali comporta una procedura complicata. Richiede una grande quantità di materiale di riferimento e una durata relativamente lunga. Anche se la metodologia suggerita non può sostituire il processo di valutazione delicato, questo sistema può essere utilizzato ai fini dello screening. Questa proposta di sistema ridurrebbe considere.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato da una ricerca nucleare e programma di sviluppo della National Research Foundation di Corea (NRF) sovvenzione finanziata dal governo coreano (n. 2017M2A2A6A02019904).
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 68Ga/68Ge generatore | ITG | Company-10 | mCi |
| Soluzione di acido cloridrico | Sigma-aldrich | 84429 | |
| Acetato di sodio | Sigma-aldrich | S2889 | |
| C18 cartuccia in fase inversa | Acque | WAT020515 | |
| 0,22-μ m filtro sterile | Milllipore | SLGV033RS | |
| Radio-TLC scanner | Bioscan | AR2000 | |
| ITLC carta | Agilent | SGI001 | |
| Acido citrico | Sigma-aldrich | 251275 | |
| HPLC | Waters-Waters | 1525 sistema contenente pompa binaria, array di fotodiodi (Waters 2998), rivelatore di radioattività (Raytest, Gabi) | |
| Acetonitrile | J.T. Baker | 14-650-359 | |
| Acido trifluoroacetico | Sigma-aldrich | 302031 | |
| Eagle modificato di Dulbecco | Thermo fisher scientific | 11965092 | |
| siero fetale bovino | Thermo fisher scientific | 16000044 | |
| T175 fiasche. | Corning | CLS431080 | |
| Tripsina-EDTA (0,25%) | Thermo fisher scientific | 25200072 | |
| penicillina-streptomicina | Thermo fisher scientific | 15240112 | |
| γ-counter | Perkin | Wizard 3 | |
| Siringa Insunlin | Becton Dickinson | 326105 | |
| Pompa Synringe | Harvard Apparecchio | 70-4500 | |
| micro-PET/CT | Siemens Inveon | - |
Riferimenti
- Friedlander, M., et al. Definition of Two Angiogenic Pathways by Distinct alpha v integrins. Science. 270 (5241), 1500-1502 (1995).
- Janssen, M. L., et al. Tumor Targeting with Radiolabeled alpha v beta 3 Integrin Binding Peptides in a Nud....
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Ristampe e permessi
