Qui, presentiamo un modello fisiologico ed efficace per studiare i meccanismi molecolari sottostanti la secrezione dell'ormone intestinale e l'assorbimento intestinale — piccolo intestino irrorato isolato del ratto.
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Articolo metodologico
Meccanismi di secrezione dell'ormone intestinale utilizzando l'isolato irrorati intestino tenue del ratto
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'intestino è il più grande organo endocrino del corpo, producendo più di 15 ormoni peptidici differenti che regolano l'assunzione di cibo e di appetito, digestione, assorbimento dei nutrienti e distribuzione ed escursioni di glucosio post-prandiale. Comprensione dei meccanismi molecolari che regolano la secrezione dell'ormone dell'intestino è fondamentale per comprendere e tradurre la fisiologia dell'ormone dell'intestino. Tradizionalmente, i meccanismi di secrezione dell'ormone dell'intestino sono sia studiati in vivo (in animali da esperimento o esseri umani) o utilizzando primaria di disecrezione intestinale mucoso colture cellulari o linee cellulari. Qui, presentiamo un piccolo intestino irrorato isolato del ratto come metodo alternativo per lo studio della secrezione dell'ormone dell'intestino. Le virtù di questo modello sono che essa si basa sull'intestino intatto, significato che ricapitola la maggior parte dei parametri fisiologicamente importanti responsabili della secrezione negli studi in vivo, tra cui polarizzazione della mucosa, paracrine relazioni e percorsi di esposizione di aspersione/stimolo. Inoltre a differenza di studi in vivo, l'intestino tenue irrorato isolato del ratto consente quasi completo controllo sperimentale e la valutazione diretta della secrezione. In contrasto con gli studi in vitro, è possibile studiare sia la grandezza e la dinamica della secrezione e per affrontare le questioni importanti, come ad esempio causano quello che stimoli la secrezione degli ormoni dell'intestino diverse, da che parte dell'intestino (luminal o vascolare) è la secrezione stimolato e analizzare in sensori molecolari dettaglio sottostante la risposta secretiva. Inoltre, la preparazione è un potente modello per lo studio dell'assorbimento intestinale e i dettagli riguardanti le dinamiche di assorbimento intestinale, tra cui i trasportatori responsabili.
Introduzione
L'intestino è il più grande organo endocrino del corpo, producendo più di 15 ormoni peptidici differenti che regolano l'assorbimento dei nutrienti e la disposizione dei nutrienti, la crescita intestinale e modulano l'appetito1. Ormoni dell'intestino sono, pertanto, coinvolti in molti processi fisiologici fondamentali, e la comprensione di questi pattern di secrezione e i dettagli molecolari che controllano la secrezione degli ormoni rispettivi è così importante per la nostra base fisiologica comprensione e per affrontare aspetti traslazionali delle azioni di ormone intestinale; ma come uno può studiare i meccanismi molecolari rilevamento secrez....
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Protocollo
Tutti gli studi sono stati condotti con autorizzazione da parte dell'Ispettorato di esperimenti di animale (2013-15-2934-00833) danese e comitato etico locale, conformemente agli orientamenti della legislazione danese sulla sperimentazione animale (1987) e la nazionale Istituti di salute (numero di pubblicazione 85-23).
1. sperimentali animali
- Ottenere i ratti maschii di Wistar (250 g) e casa 2 per gabbia, con ad libitum accesso a cibo standard e acqua e mantenere in un 12:12 h ciclo luce-buio. Le nostre strutture di animali utilizza acqua non trattata e Alrtromin roditore chow (1319 FORTI, Brogaarden, Lynge, Danimarca).
Nota: ....
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Risultati
La capacità di determinare se un dato stimolo provoca la secrezione dell'ormone dell'intestino di interesse si basa su una secrezione basale costante. Inoltre, se nessuna risposta allo stimolo è osservata, una robusta risposta secretiva per il controllo positivo deve essere evidente per escludere che la mancanza di risposta allo stimolo test non riflette una generale mancanza di reattività. Figura 2A e 2B Mostra un esempio di dati di buona qu.......
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Discussione
Il piccolo intestino irrorato isolato del ratto è un potente strumento di ricerca che permette le dinamiche e i meccanismi molecolari alla base di secrezione dell'ormone dell'intestino per essere studiato nei minimi dettagli. Il punto più critico per il successo della produzione di dati con questo modello è l'intervento chirurgico. Manipolazione dell'intestino causerà inevitabilmente qualche danno all'intestino e dovrà perciò essere mantenuto per un assoluto minimo. Ancora più importante, la velocità di funzionamento è l.......
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Dichiarazioni
Gli autori di questo lavoro non dichiarano nessun potenziali conflitti di interesse rilevanti per questo articolo.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato da una sovvenzione illimitata a Prof. ssa Jens Juul Holst da Novo Nordisk centro per ricerca di base metabolica (Novo Nordisk Foundation, Danimarca), una sovvenzione separata dalla Fondazione Novo Nordisk per fare gli studi di aspersione del roditore (grant no. NNF15OC0016574), una sovvenzione a Prof. ssa Holst dal Consiglio europeo della ricerca (Grant no.695069) e Unione europea è settimo programma quadro di ricerca, TechnologicalDevelopment e attività di dimostrazione (Grant No. 266408) così come un dottore di ricerca concedere a Rune E. Kuhre dalla Fondazione Lundbeck (R264-2017-3492). Ringraziamo Jenna E. Hunt e Carolyn F. Deacon ....
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Sostanze chimiche per tampone di perfusione | |||
| Albumina sierica bovina (BSA) | Merck | 1.12018.0500 | |
| Cloruro di calcio diidrato (CaCl2 x 2 H2O) | Merck | 102382 | |
| destrano 70 | Pharmacosmos | 40014 | |
| Sale disodico dell'acido fumarico (C44H2Na2O4) | Sigma Aldrich | F9642 | |
| Glucosio (C6H12O6) | Merck | 108342 | |
| Solfato di magnesio epataidrato (MgSO4) | Merck | 105886 | |
| Cloruro di potassio (KCl) | Merck | 104936 | |
| Diidrogeno fosfato di potassio (KH2PO4)Merck | 104873 | ||
| Sale sodico dell'acido piruvico (C3H3NaO4) | Merck | 106619 | |
| Sodio bicarbonato (NaHCO3) | Merck | ||
| Cloruro di sodio (NaCl) | Merck | 106404 | |
| Sodio L-glutammato monoidrato (C5H8NNaO4 x H2O) | Merck | 106445 | |
| Name | Company | < strong>Numero di catalogo | Comments |
| Perfusion equitment | |||
| Sistema di perfusione universale | Harvard Bioscience, Inc. | ||
| 732316 UNITÀ DI BASE UNIPER UP-100, TIPO 834 | Harvard Bioscience, Inc. | ||
| Pompa a rulli, con quattro canali | Harvard Bioscience, Inc. | 730100 | |
| Windkessel | Harvard Bioscience, Inc. | ||
| Circolatore termostatico, volume vasca 3L, 230V/50Hz | Harvard Bioscience, Inc. | ||
| Tavolo operatorio, riscaldato su treppiede, tipo 873 | Harvard Bioscience, Inc. | ||
| Cannula con basked, OD = 2,0 mm, ID = 1,0 mm | Harvard Bioscience, Inc. |
Riferimenti
- Rindi, G., Leiter, A. B., Kopin, A. S., Bordi, C., Solcia, E. The "normal" endocrine cell of the gut: changing concepts and new evidences. Annals of the New York Academy of Sciences. 1014, 1-12 (2004).
- Brighton, C. A., et al.
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Ristampe e permessi
