Questo protocollo è per le prestazioni dell'esclusione gastrica di un-anastomosi (OAGB) il ratto. L'operatore esegue una tasca gastrica lunga e tubolare pinzati, seguita dall'anastomosi cucita a mano. Per questo modello, l'operatore riproduce lo stesso rapporto tra biliopancreatica e arto comune in esseri umani; di conseguenza, l'arto biliopancreatic misura 35 cm.
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Articolo metodologico
Esclusione gastrica di un-anastomosi (OAGB) in ratti
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'obiettivo del presente protocollo è quello di impostare un modello preclinico di chirurgia bariatrica e, più in particolare, OAGB in ratti obesi. Basato su questo modello preclinico, studi longitudinali possono essere effettuati per fornire una migliore comprensione dei meccanismi alla base i risultati visti dopo chirurgia bariatrica in esseri umani. Per questo scopo, ratti sono operati con una laparotomia in anestesia generale con isoflurano. In primo luogo, il chirurgo crea una tasca gastrica lunga e tubolare: dopo curva maggiore e dissezione iatale, stomaco nonglandular è cucita con punti metallici e rimosso. Quindi, lo stomaco rimanente viene graffettato anche al fine di creare un tubo gastrico ed escludere il antrum dello stomaco. Dopo di che, il chirurgo esegue un singolo fine--lato gastrojejunostomy 35 cm dall'angolo di duodenojejunal. La lunghezza degli arti è stato scelto al fine di riprodurre la stessa proporzione tra l'arto biliopancreatica (BPL) e la lunghezza degli arti (CL) comune come in chirurgia bariatrica umana. L'operazione termina di chiusura aponeurotica e cutanea. La gestione postoperatoria precoce consiste di idratazione sottocutanea, un'iniezione intramuscolare di antibiotica profilattica, un parietale iniezione di lidocaina, la somministrazione di antidolorifici e una progressiva reintroduzione della dieta.
Introduzione
L'obesità morbosa è un problema sanitario importante nel mondo occidentale, con l'aumento di prevalenza1. Chirurgia bariatrica rimane la terapia efficace solo a lungo termine per obesità morbosa2, con evidenti benefici correlati all'obesità comorbidità3. Gastrica Roux-en-Y bypass (RYGB) rimane il gold standard come è una delle procedure più antiche e uno della maggior parte eseguiti in tutto il mondo con il follow-up più lungo4. OAGB è una procedura più recente in primo luogo descritta nel 2001 da Rutledge5. Esso è stato descritto come un'alternativa efficace a RYGB6 e ha alcuni vantaggi. Primi dati indicano un'efficacia simile a RYGB rispetto alla perdita di peso e la risoluzione delle comorbilità associate all'obesità6,7. Inoltre, i rischi di stenosi o perdita dell'anastomosi di jejunojejunal in RYGB è evitato, e il rischio di un'ernia interna potrebbe essere inferiore con RYGB8.
I meccanismi fisiologici alla base di perdita di peso dopo chirurgia bariatrica rimangono discutibili e possono essere difficili da studiare in esseri umani9. Modelli animali sono utili per capire come bariatrico ambulatori possono influenzare il metabolismo del glucosio, neuroendocrine modifiche o meccanismi di sazietà. Mancano i dati comparativi tra le procedure e gli effetti a lungo termine di questi interventi devono essere meglio capito10. Non è possibile standardizzare completamente cura clinica pre- e postoperatoria, e follow-up soddisfacente può essere difficile da raggiungere: alcuni studi rapporto perdita di-follow-up i tassi addirittura del 30% per il primo anno11.
Il concetto di bypass gastrico è una combinazione di una procedura restrittiva, a causa della creazione di una tasca gastrica e un grado moderato di malassorbimento, risultante dall'esclusione del duodeno e del digiuno prossimale dal transito gastrointestinale. Attualmente, la lunghezza degli arti in chirurgia bariatrica è ancora una questione di dibattito12,13. I dati disponibili mostrano che un'alta variabilità delle procedure e nessun consenso è stato raggiunto ancora sulla lunghezza dell'arto ottimale per OAGB14,15. Tuttavia, molti autori hanno segnalato una lunghezza di 200 cm BPL come standard per la OAGB16,17,18. La lunghezza media del piccolo intestino è circa 700 cm19.
Diversi modelli del roditore di RYGB sono stati sviluppati in tutto il mondo20, con grandi variazioni in termini di formato del sacchetto, lunghezza degli arti e la conservazione del nervo vagale. Ma molto pochi autori hanno segnalato un modello di OAGB sperimentale; per questo motivo, ottenuto team ha sviluppato un modello di OAGB in collaborazione con chirurghi bariatrici. La spiegazione razionale dietro lo sviluppo del modello era di imitare il bypass gastrico praticato in esseri umani. Il modello include la costruzione di una tasca gastrica con l'esclusione del antrum e del corpo dello stomaco. Per questo, il chirurgo fa un'ablazione dello stomaco nonglandular utilizzando un dispositivo di fissaggio. Rispetto ad un precedente protocollo20, il team ha deciso di aggiungere un trattamento antibiotico profilattico per-operatoria al fine di diminuire la morbosità collegata all'anastomosi gastrointestinale, come di routine in chirurgia umana21.
La lunghezza dell'arto ratto utilizzata in questo modello è stato scelto di riprodurre il rapporto tra la BPL e CL in esseri umani. Misure preliminari hanno dimostrato la lunghezza totale dell'intestino tenue in ratti di essere tra 90 e 120 cm22. Di conseguenza, la lunghezza della BPL scelta per OAGB era 35 cm. Inoltre, questo modello è praticabile senza fare qualsiasi legatura vascolare, evitando l'ischemia tasca gastrica.
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Protocollo
Uso di tutti gli animali conformi alle linee guida comunitarie ed è stato approvato dal comitato etico locale (Comité d'éthique en expérimentation animale N ° 121) e il Ministero dell'istruzione superiore e ricerca (Ref #02285.03).
1. gli animali e diete
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Ratti
- Utilizzare i ratti maschii di Wistar pesano 260-320 g, iniziato su una dieta ad alta percentuale di grassi (HFD) a 7 settimane dell'età.
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Dieta
- Indurre un obesità indotta da dieta, con almeno 12 settimane preoperative della HFD. Dare i ratti libero accesso all'acqua e la HFD.
Nota: La HFD consiste in una dieta di roditore ipercalorica laboratorio purificato che contiene 45% grasso (Vedi Tabella materiali). - Garantire che i ratti sono obesi al momento della chirurgia, con un peso compreso tra 600-800 g.
- Indurre un obesità indotta da dieta, con almeno 12 settimane preoperative della HFD. Dare i ratti libero accesso all'acqua e la HFD.
2. materiale
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Apparecchiature chirurgiche
- Autoclave tutti gli strumenti chirurgici prima della chirurgia.
- Stendere tutti gli strumenti chirurgici necessari per la procedura (Vedi Tabella materiali).
- Eseguire l'anastomosi sotto lenti di ingrandimento, utilizzando strumenti convenzionali e microchirurgica.
- Assicurarsi che i ratti siano posizionati sulla piastra di riscaldamento ad una temperatura di 37 ° C e sotto una lampada di calore. Posizionare il quadro elettrico isotermico come necessario.
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Preparazione di anestesia e animale
- Anestetizzare il topo con un'inalazione di 3% vol isoflurane in aria per l'induzione dell'anestesia nella casella del roditore.
- Trasferire il ratto a piastra riscaldante e mantenere l'anestesia con la maschera facciale presso la stessa portata del 3%. Assicurarsi che l'amputate sia completa pizzicando la coda dell'animale.
- Radere il pelo anteriore, corrispondente alla zona di incisione di laparotomia, un ~ 3 cm-ampia zona al xifoideo al bacino animale, utilizzando un rasoio elettrico.
- Radere una zona di 3 cm di larghezza sulla parte posteriore dell'animale, centrato sul collo dell'animale. Questo passaggio facilita la conduzione elettrica monopolare.
- Spruzzare una soluzione disinfettante a base alcolica sopra il sito di operazione.
3. chirurgia
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Laparotomia
- Applicare antisettico locale a base di alcool sulla pelle rasata.
- Aprire l'addome con un'incisione cutanea mediana dal processo xifoideo di circa 3 cm di lunghezza con un bisturi. Aprire la fascia e il peritoneo lungo il linea alba con un bisturi monopolare.
- Garantire che la cavità peritoneale è aperto su tutta la lunghezza dell'incisione cutanea.
Esporre la cavità peritoneale con un auto-retrattore.
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Maggiore è curva e dissezione iatale
- Sezionare la curva gastrica maggiore dalla giunzione tra stomaco ghiandolare e nonglandular sul lato sinistro dell'esofago addominale con forbici chirurgiche.
- Progressivamente coagulare i vasi Gastrosplenico con il bisturi monopolare, per liberare completamente la grande curva gastrica per il suo angolo. Quindi è possibile esporre la zona iatale sezionando dei legamenti sottile.
- Sezionare il lato destro dell'esofago addominale, preservando l'arteria gastrica sinistra e nervo vagale, utilizzando un dissettore manuale.
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Confezione di tasca gastrica
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Ablazione di stomaco nonglandular
- Applicare un fiocco di 35 millimetri pistola (Vedi Tabella materiali) all'incrocio tra lo stomaco ghiandolare e nonglandular sul lato sinistro della giunzione gastroesophageal. Assicurarsi che lo stomaco nonglandular sia sul lato destro della pinzatrice.
- Sparare la pistola e quindi rimuovere lo stomaco resecato nonglandular.
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Tasca gastrica
- Applicare una seconda cucitrice utilizzando un dispositivo di toraco-addominale (TA) (3-3.5 mm) (Vedi Tabella materiali), parallelo al primo pinzatura, sul lato destro della giunzione gastroesophageal per escludere il antrum e una parte del corpo dello stomaco.
- Garantire che il risultato delle due linee fiocco è una tasca gastrica di circa 0,5 cm di larghezza.
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Ablazione di stomaco nonglandular
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OAGB
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Misurazione di piccole viscere
- Individuare l'angolo di duodenojejunal. Il digiuno prossimale è la porzione di piccole viscere si trova sotto la parte mediale del colon; è la parte solo mobili di piccole viscere nel ratto.
- Con un nastro lungo cm 5, manualmente misura 35 cm dall'angolo di duodenojejunal. Quindi eseguire un puntiforme per enterotomia sul lato antimesenteric del digiuno.
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Anastomosi gastrojejunal
- Eseguire un gastrotomy puntiforme con il bisturi monopolare sul lato curva maggiore della tasca gastrica, precisamente tra le due precedenti linee di graffetta. Se la tasca gastrica non è totalmente vuota, eseguire leggera pressione manuale della tasca gastrica per svuotarlo.
- Eseguire un'anastomosi gastrojejunal fine--lato con forcipe nontraumatic e un piccolo porta-aghi.
- Avviare la sutura con due punti dell'estremità del polipropilene isotattico 7-0 (Vedi Tabella materiali), sutura delle due estremità della gastrotomia con le estremità del enterotomy.
- Quindi, con gli stessi thread utilizzati per i punti di due estremità, eseguire due suture in esecuzione su ciascun lato dell'anastomosi. Se necessario, è possibile restituire l'anastomosi per facilitare la manovra. Garantire la qualità dell'anastomosi posizionando vicino maglie, almeno sette o otto su ogni lato dell'anastomosi.
- Prendere 1 mm di larghezza sierosa in ogni punto. Evitare l'assunzione di qualsiasi mucosa nel punto per seppellire delicatamente la mucosa enterica e gastrica all'interno la sutura.
Nota: Il risultato è un'anastomosi gastrojejunal terminolateral con un arto di biliopancreatic sulla sinistra e un alimentari /CL (AL) sulla destra. Garantire che l'anastomosi è permeabile con una leggera pressione della tasca gastrica.
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Misurazione di piccole viscere
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Chiusura e cure immediate
- Sciacquare la cavità peritoneale con soluzione di NaCl 0,9% e sostituire manualmente gli organi addominali nella loro posizione fisiologiche.
- Nelle vicinanze della parete addominale con un suturare corrente di intrecciato poliestere sutura 2-0 (Vedi Tabella materiali) con un classico porta-aghi.
- Chiudere la pelle con una sutura in esecuzione di polyglactin 910 4-0 (Vedi Tabella materiali).
- Eseguire due parietali iniezioni di lidocaina 1% su ciascun lato della laparotomia. Somministrare una dose totale di 1 mL/kg di lidocaina 1% nella aponeurosi dei muscoli addominali del rectus.
4. postoperatoria
- Eseguire un'iniezione intramuscolare di 20.000 unità/kg penicillina G.
- Eseguire un'iniezione sottocutanea di 10 mL di potassio di soluzione isotonica poliionica (2 g di KCl/L, 4 g di NaCl/L e 50 g di glucosio/L). In questa iniezione, è possibile mescolare con analgesici adatti come buprenorfina (0,1 mg/kg) e meloxicam (2 mg/kg).
- Posizionare i ratti in gabbie individuali, riscaldate da una lampada, fino a quando non sono completamente svegli.
- Ispezionare frequentemente gli animali al fine di amministrare il trattamento postoperatorio con analgesia adatto e idratazione (soluzione isotonica poliionica).
- Iniettare adatto analgesico, buprenorfina (0,1 mg/kg) e meloxicam (2 mg/kg), per via sottocutanea dall'immediato postoperatorio periodo fino al giorno 4, ogni 12 h.
- Mantenere i ratti con libero accesso all'acqua durante il giorno 1. Il giorno 2/3, dare loro libero accesso a una dieta liquida. Il giorno 4, dare loro accesso ad libitum ad una dieta normale.
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Risultati
Questo protocollo è riproducibile e imita OAGB come praticato sugli esseri umani. La sicurezza di questo protocollo è supportata con dati pubblicati23,24 con un basso tasso di mortalità tra il 12% e il 25%. Diversi chirurghi nel team di ricerca con un tasso di mortalità simili hanno praticato questo protocollo.
Tuttavia, chirurgia del roditore apprendimento è complessa, ...
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Discussione
Questo protocollo ha il vantaggio di che imita OAGB praticato ordinariamente in esseri umani. La sicurezza e la riproducibilità in ratti sono stati dimostrati nei risultati clinici e metabolici.
L'anastomosi nel presente protocollo pone una difficoltà tecnica ed è il principale punto critico. Per questo, è necessario utilizzare specifici strumenti microsurgical, come un porta-aghi di microchirurgia o lenti di ingrandimento. Al fine di realizzare un'anastomosi ermetica senza qualsiasi stenosi, ...
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori vorrei ringraziare Jean Pierre Marmuse per il suo costante aiuto e supporto; Rosa canina Voitellier, Jean-Baptiste Cavin e Houneyda El Jindi per impostare i modelli e le illustrazioni; Anne-Charlotte Jarry e Andreia Goncalves per il loro aiuto con i video; Sara J. Zaat di modificare il testo in inglese. Matthieu A. Siebert e Lara Ribeiro-Parenti erano destinatari delle sponsorizzazioni dalla Fondation pour la recherche médicale (FRM) e dell'Association française de chirurgie (AFC).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Dieta ricca di grassi, 45% di grassi | Genestil, Royaucourt, Francia | C 1090-45 | http://www.genestil.com/ |
| Metzenbaum Forbici | World Precision instrument, Sarasota, Stati Uniti | 501739 | |
| https://www.wpi-europe.com Dumont Pinzette | World Precision instrument, Sarasota, US | 14098 | https://www.wpi-europe.com |
| Iris Forceps | World Precision instrument, Sarasota, US | 15915 | Forbici https://www.wpi-europe.com |
| Iris 10 cm | Strumento di precisione, Sarasota, US | 14218 | Porta |
| ago | Strumento di precisione mondiale, Sarasota, US | 14110 | |
| Divaricatore autobloccante https://www.wpi-europe.com Alm | Strumento di precisione, Sarasota, US | 14240 | https://www.wpi-europe.com |
| Pinze emostatiche Baby Mixter, Strumento di precisione mondiale ad angolo retto | , Sarasota, Stati Uniti | 501240 | https://www.wpi-europe.com |
| tamponi sterili in tessuto non tessuto | LCH Medical Products, Parigi, Francia | SN40-0755 | |
| www.lch-medical.com Lente binoculare galileiana 2,5 volte | strumento di precisione mondiale, Sarasota, Stati Uniti | 504056 | https://www.wpi-europe.com |
| Filettatura digestiva: polipropilene isotattico, monofilo Prolene 7-0 nbsp; | Ethicon, Issy les Moulineaux, Francia | EH7813E | www.ethicon.com |
| Filo parietale : Poliestere intrecciato rivestito Ti-Cron 2-0 | Covidien, Mannsfield, MA, USA | 3003-52 | www.covidien.com |
| Filo cutaneo : Polyglactin, VICRYL RAPIDE 4-0 | Ethicon, Issy les Moulineaux, Francia | VR3100 | www.ethicon.com |
| ETS-Flex 35 mm graffatrice | Ethicon, Issy les Moulineaux, Francia | ATS45 | www.ethicon.com |
| Cucitrici ricaricabili immediate | Ethicon, Issy les Moulineaux, Francia | XR30V | www.ethicon.com |
| TA-DST 30mm-3.5mm | Ethicon, Issy les Moulineaux, France | TX30B | www.ethicon.com |
| Alcolico 5% Betadine | MEDA Pharma, Merignac, France | 41085 | www.medapharma.fr |
| LIDOCAINE AGUETTANT 20 mg/ml | LABORATOIRE AGUETTANT, Lyon, France | 3400940000000.0 | https://www.aguettant.fr |
| Penicillina G 5MUI | Panpharma, Luitre, France | 3.40E+12 | https://www.panpharma.eu/fr |
| Bionolyte G5 ; Cloruro di sodio 0,4%, glucosio 5%, cloruro di potassio 0,2%) | Baxter, Maurepas, Francia | ||
| Dieta liquida | Genestil, Royaucourt, Francia | C-0200T | http://www.genestil.com/ |
| Isoflurano 100% | Centravet, Plancoet, Francia | ISO007 | http://cooperative.centravet.net |
Riferimenti
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