Questo protocollo descrive la sintesi e la caratterizzazione di un trans- ciclottene (TCO)-anticorpo e un radioligand tetrazine Lu-etichettati (Tz) 177per pretargeted radioimmunotherapy (PRIT) modifica. Inoltre, vi si descrive l'uso di questi due costrutti di biodistribuzione in vivo e studi longitudinali terapia in un modello murino di cancro colorettale.
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Articolo metodologico
Pretargeted Radioimmunotherapy basato sulla reazione di Diels-Alder domanda inversa Electron
In questo articolo
Sommario
Abstract
Mentre radioimmunoterapia (RIT) è un approccio promettente per il trattamento del cancro, l'emivita lunga farmacocinetica degli anticorpi radiomarcati può provocare dosi di alta radiazione ai tessuti sani. Forse non a caso, diverse strategie differenti sono state sviluppate per aggirare questa limitazione preoccupante. Uno dei più promettenti di questi approcci è pretargeted radioimmunotherapy (PRIT). PRIT si basa sul disaccoppiamento radionuclide dall'immunoglobulina, iniettando loro separatamente e quindi consentendo loro di combinare in vivo presso il tessuto bersaglio. Questo approccio sfrutta le eccezionali proprietà di targeting tumorale di anticorpi costeggiando i loro svantaggi farmacocinetiche, quindi riducendo le dosi di radiazione ai tessuti non bersaglio e facilitare l'uso di radionuclidi con emivite che sono considerato troppo breve per uso in radioimmunoconjugates tradizionale. Negli ultimi cinque anni, il nostro laboratorio ed altri hanno sviluppato un approccio in vivo pretargeting basato sulla reazione di Diels-Alder (IEDDA) dell'elettrone-domanda inversa tra trans- ciclottene (TCO) e tetrazine (Tz). Questa strategia è stata applicata con successo a pretargeted tomografia a emissione di positroni (PET) ed emissione del singolo-fotone tomografia (SPECT) imaging con una varietà di sistemi antigene-anticorpo. In un paio di pubblicazioni recenti, abbiamo dimostrato l'efficacia di PRIT basati su IEDDA in modelli murini di adenocarcinoma duttale pancreatico e carcinoma colorettale. In questo protocollo, descriviamo protocolli per PRIT utilizzando un 177Lu-DOTA-etichettati tetrazine radioligand ([177Lu] Lu-DOTA-PEG7- Tz) e una variante di TCO-modificato del cancro colorettale targeting huA33 anticorpo (huA33-TCO). Più specificamente, descriveremo la costruzione di huA33-TCO, la sintesi e radiolabeling [177Lu] Lu-DOTA-PEG7- Tz e le prestazioni di biodistribuzione in vivo e studi longitudinali terapia in modelli murini di carcinoma colorettale.
Introduzione
Radioimmunoterapia (RIT) — l'uso degli anticorpi per la consegna dei radionuclidi terapeutici ai tumori — è stata a lungo un seducente approccio per il trattamento di cancro1,2. Infatti, questa promessa è stata sottolineata dalla United States Food and Drug Administration l'approvazione di due radioimmunoconjugates per il trattamento del linfoma Non-Hodgkin: 90Y-ibritumomab tiuxetano e 131-tositumomab3 , 4. ma anche dai suoi primi giorni, le prospettive cliniche di RIT sono state ostacolate da una complicazione critica: intensità ....
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Protocollo
Tutti in vivo animale esperimenti descritti in questo lavoro sono sono eseguiti secondo protocolli approvati ed eseguiti sotto la Guida di riferimento etica del Memorial Sloan Kettering Cancer Center, Weill Cornell Medical Center e Hunter College Istituzionale cura degli animali e uso comitati (IACUC).
1. la preparazione del huA33-TCO
Nota: La sintesi di huA33-TCO è stato precedentemente segnalati29. Tuttavia, per facilitare il lettore, viene replicata qui con regolazioni per condizioni ottimali.
- In un tubo del microcentrifuge 1,7 mL, preparare una soluzione di 125 μL di....
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Risultati
La coniugazione del TCO per huA33 si basa sull'accoppiamento tra il TCO-NHS ammina-reattivo e i residui di lisina sulla superficie dell'immunoglobulina. Questo metodo è altamente affidabile e riproducibile e affidabile produce una grado-di-etichettatura di TCO/mAb 2-4. In questo caso, spettrometria di massa MALDI-ToF è stata impiegata per confermare un certo grado di etichettatura di circa 4,0 TCO/mAb; un valore simile è stato ottenuto utilizzando un tetrazine fluorophore-modificato come .......
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Discussione
Uno dei punti di forza di questo approccio per in vivo pretargeting — soprattutto in relazione alle strategie fondate sugli anticorpi anticorpo e radioattivi apteni — è la sua modularità: trans- ciclottene moiety possono essere aggiunti a qualsiasi anticorpo, e tetrazine radioligands possono essere radioattivi con una straordinaria varietà di radionuclidi senza alterare la loro capacità di reagire con i loro partner di clic. Ancora l'adattamento di questo approccio per altri sistemi antigene/anticorpo n.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori ringraziano il Dr. Jacob Houghton per conversazioni utili. Gli autori inoltre ringraziare il NIH per loro generosi finanziamenti (R00CA178205 e U01CA221046).
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| (E)-Cicloott-4-enile 2,5-diosso-1-pirrolidinil carbonato (TCO-NHS) | Sigma-Aldrich 764523 | Conservare a -80 gradi; C | |
| 2,5-Dioxo-1-pirrolidinil 5-[4-(1,2,4,5-tetrazin-3-il)benzilammino]-5-ossopentanoato (Tz-NHS) | Sigma-Aldrich | 764701 | Negozio a -80 ° C |
| Acetonitrile (MeCN) | Fisher Scientific | A998-4 | |
| Acetato di ammonio (NH4OAc) | Fisher Scientific | A639-500 | |
| Boc-PEG7-ammina (O-(2-amminoetil)-O′-[2-(Boc-ammino)etil]esaetilenglicole) | Sigma-Aldrich | 70023 | Conservare a -20 ° C |
| Diclorometano (DCM) | Fisher Scientific | D143-1 | |
| Dimetil solfossido (DMSO), anidro | Fisher Scientific | D12345 | |
| EMD Millipore Amicon Ultra-2 Unità di filtro centrifuga | Fisher Scientific | UFC205024 | |
| GE Healthcare Colonne di desalinizzazione PD-10 monouso | Fisher Scientific | 45-000-148 | |
| N, N-dimetilformammide (DMF), anidro | Fisher Scientific | AC610941000 | |
| soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) | Fisher Scientific | 70-011-044 | 10x concentrato |
| p-SCN-Bn-DOTA | Macrociclici | B-205 | Conservare a -20 ° C |
| Trietilammina (TEA) | Fisher Scientific | AC157911000 | |
| Acido trifluoroacetico (TFA) | Fisher Scientific | A116-50 | |
| Misuratore di tumore | Peira TM900 | Peira TM900 |
Riferimenti
- Goldenberg, D. M. Targeted Therapy of Cancer with Radiolabeled Antibodies. Journal of Nuclear Medicine. 43 (5), 693-713 (2002).
- Goldenberg, D. M., et al. Radioimmunotherapy of B-cell Lymphomas with Iodine-131-labeled LL2 Monoclonal Anti....
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Ristampe e permessi
